Липоевая кислота р: Thorne Research, R-липоевая кислота, 60 капсул

Содержание

Super R-Lipoic Acid 240 mg 60 caps

Описание

Super R-Lipoic Acid (Супер R-Липоевая кислота) от Life Extension — это новая формула липоевой кислоты, которая отличается высокой степенью эффективности, стабильности и усваиваемости. Купить R-липоевую кислоту предпочитают за то, что она является более естественной для организма формой.

Существуют различные формы альфа-липоевой кислоты, но именно R-липоевая вырабатывается и используется организмом. То есть это естественный для организма компонент. Существует также s-липоевая форма, но она изготавливается химическими способами. Большинство добавок альфа-липоевой кислоты содержат и R, и S форму. При этом R-липоевая кислота является естественной для организма и более эффективной.

R-липоевая кислота обеспечивает антиоксидантную защиту и защищает организм от окислительных воздействий. Она эффективно нейтрализует свободные радикалы и поддерживает противовоспалительные функции. При этом она поддерживает работу митохондрий, которые за счет этот производят больше полезной для клеток энергии.

Функциональное действие и показания к применению Super R-Lipoic Acid Life Extension

  • Восстанавливает и защищает клетки от негативных воздействий и повреждений.
  • Обеспечивает антиоксидантную защиту.
  • Стимулирует работе митохондрий, способствуя выработке энергии.

Особенности Super R-Lipoic Acid от Life Extension

  • 60 капсул Супер R-Липоевой кислоты по 240 мг.
  • Усиленная и более естественная форма.
  • Является биологически активной добавкой.
  • Пригодна для вегетарианцев.

Super R-Lipoic Acid Life Extension — способ применения

Принимать 1 или 2 капсулы в день или по рекомендации врача.
Принимать в одно и то же время и желательно на голодный желудок.

Условия хранения

Хранить в сухом, прохладном, недоступном для детей месте при температуре не выше +25°C.

Противопоказания

Индивидуальная непереносимость компонентов, беременность и кормлению грудью.

Производитель: Life Extension – США

Состав

Размер порции: 1 капсула
Количество % дневной нормы
Sodium30 mg1%
Bio-Enhanced Stabilized Na-RALA sodium R-lipoate (providing 240 mg of R- Lipoic acid300 mg*
* Суточная норма не определена.

R-липоевая кислота для здоровья и похудения

Липоевая кислота (альфа-липоевая кислота, r-липоевая кислота, тиоктовая кислота, АЛК) – жирная кислота, которая содержится в митохондриях и принимает участие в энергетическом обмене.

Отличие тиоктовой кислоты от других жирных кислот состоит в том, что ее антиоксидантные свойства сохраняются как в водной, так и жировой среде; как в окисленной, так и в восстановленной формах. Это отличает ее от водорастворимого витамина С и жирорастворимого антиоксиданта — витамина Е. Добавка повышает уровень глутатиона и коэнзима Q10 в межклеточном пространстве и усиливает процесс гликозилирования белка.

Область применения альфа-липоевой кислоты:
— инсулинорезистентность
— сахарный диабет 2 типа
— дислипидемия и атеросклероз (профилактика и лечение)
— заболевания печени любой этиологии
— пожилой возраст
— хронический стресс
— избыточный радиационный фон
— тяжелые инфекции, отравления тяжелыми металлами
— полиневропатии любой этиологии

R-липоевая кислота является активным изомером альфа-липоевой кислоты и лучше всего усваивается организмом. Thorne использует R-липоевую кислоту, связанную с натрием, что дополнительно повышает ее стабильность и усваиваемость.

В 1 капсуле содержится 100 мг r-липоевой кислоты, она обладает большей активностью по сравнению с альфа-липоевой и не раздражает желудок, в отличие от последней. Для меня это имеет значение.
Принимала по 1 капсуле 2 раза в день. Одной баночки мне хватило на месяц.

При приеме АЛК следует учитывать, что она, освобождая организм от вредных веществ, может прихватить с собой  и полезные — поэтому надо развести во времени r- или альфа-липоевую кислоту с магнием, железом, кальцием, калием и т.д., как минимум на 2 часа.

R-липоевая кислота — одна из самых полезных добавок, но цена не совсем гуманная. Поэтому ограничиваюсь курсом 1 месяц  два раза в год. Снижения веса за месяц приема я не наблюдала, но на сладенькое как-то не тянуло. Возможно, при длительном приеме вес пойдет на убыль. Но для похудения вместе с альфа-липоевой кислотой  желательно принимать L-карнитин, он способствует большей эффективности АЛК.

Благодарю всех, кто вводит мой код BDV197.
Новичкам он дает скидку 5% на первый заказ.

Не забывайте ввести код для скидки 10%:
RUSSIATEN — для России; USTEN — для США; ISTEN — для Израиля.

Другие мои отзывы:

Винпоцетин для здоровья мозга
Омега из дикой нерки от Solgar
Лютеин для здоровья глаз
Глюкоманн для похудения и здоровья ЖКТ

Комплекс для поддержки вен и капилляров

Все мои записи в сообществе

Супер R-липоевая кислота (Super R-Lipoic Acid) 240 мг 60 капсул

Супер R-липоевая кислота (Super R-Lipoic Acid) обладает более высокой биологической доступностью, стабильностью и увеличивает уровень липоевой кислоты в крови в 10–30 раз больше, чем обычная липоевая кислота. Этот уникальный R-липоат натрия помогает достигнуть пиковой концентрации данной кислоты в плазме уже через 10–20 минут после приема. Супер R-липоевая кислота снабжает организм более активной «R» формой липоевой кислоты, чем другие аналогичные добавки. Попробуйте эту добавку с липоевой кислотой нового поколения уже сегодня!

Производитель: Life Extension, США
Форма выпуска: 60 капсул
Возраст:

18+

Состав:

Компонент: Состав 1 капсулы
Натрий 30 мг
Био-Enhanced
стабилизированный
Na-RALA натрия
R-липоат
(240 мг
R-липоевая кислота)
300 мг

Другие ингредиенты:
Микрокристаллическая целлюлоза, растительная целлюлоза (капсула), стеариновая кислота.

Функциональное действие:

Супер R-липоевая кислота (Super R-Lipoic Acid) от Life Extension является мощным антиоксидантом, который поддерживает здоровье митохондрий, уровень клеточной энергии и защищает организм от окислительного стресса. В отличие от других форм липоевой кислоты, супер R-липоевая кислота обладает более высокой биодоступностью, стабильностью и увеличивает уровень липоевой кислоты в крови в 10–30 раз больше, чем обычная R-липоевая кислота. Этот уникальный R-липоат натрия помогает достигнуть пиковой концентрации данной кислоты в плазме уже через 10–20 минут после приема. Супер R-липоевая кислота снабжает организм более активной «R» формой липоевой кислоты, чем другие аналогичные добавки.

Альфа-липоевая кислота, универсальный антиоксидант, содержит две формы (изомера) — R и S — с очень различающимися свойствами. Форма “R“ — это биологически активный компонент (знакомый организму), который отвечает за уникальные антиоксидантные свойства липоевой кислоты. Форма “S“ получается химическим путем и не обладает очень высокой биологической активностью. Добавки с альфа-липоевой кислотой обычно содержат формы “R“ и “S“ в пропорции 50/50. Это означает, что 100 мг добавки с альфа-липоевой кислотой снабжают организм только 50 мг биологически активной “R“ формы.

Человеческий организм производит и использует форму “R“ липоевой кислоты. Эта активная форма, R-липоевая кислота, активно поддерживает нормальную воспалительную реакцию организма, является мощным средством для борьбы со свободными радикалами и продемонстрировала более высокую эффективность по сравнению со стандартной смесью форм «R» и «S», которая обычно входит в состав добавок с альфа-липоевой кислотой.

Новая форма R-липоевой кислоты была обнаружена в ходе специальных исследований и разработок и представляет собой средство для антиоксидантной защиты нового поколения. R-липоевая кислота продемонстрировала высочайшую биодоступность, стабильность и множество других полезных свойств. Однако с помощью нашего революционного процесса мы превращаем биологически активную «R» форму липоевой кислоты в R-липоат натрия, который в ходе недавних исследований продемонстрировал способность обеспечивать более высокий уровень липоевой кислоты в крови, чем обычная R-липоевая кислота.

Эта новая форма с липоевой кислотой не только обеспечивает пиковый уровень кислоты в крови, но и действует быстрее, в ускоренном темпе доставляя кислоту из плазмы в ткани. Исследование показало, что при приеме супер R-липоевой кислоты пиковая концентрация в плазме наблюдается уже через 10–20 минут после приема при превращении в R-липоат натрия.

В отличие от других форм липоевой кислоты супер R-липоевая кислота более стабильна внутри организма. Эта повышенная стабильность обеспечивает более высокую абсорбцию и биодоступность по сравнению с обычной R-липоевой кислотой. Благодаря мощному антиоксидантному действию R-липоевая кислота также обеспечивает поддержку работы митохондрий. Супер R-липоевая кислота от Now обладает еще большей эффективностью для поддержания высокого уровня клеточной энергии.

Применение:

Принимать по 1-2 капсулы в день. Следует принимать капсулы в одно и то же время, желательно натощак.

Противопоказания:

Индивидуальная непереносимость компонентов.

Предупреждение:

При беременности, кормлении грудью, приеме каких-либо медицинских препаратов или наличии каких-либо заболеваний следует проконсультироваться с врачом перед употреблением любых пищевых добавок. В случае возникновения каких-либо побочных реакций прекратите использование и проконсультируйтесь с врачом. Хранить в недоступном для детей месте. Не использовать, если внешняя защитная мембрана отсутствует или повреждена.

*** Производитель оставляет за собой право изменить внешний вид упаковки, состав продукта, вкусовые добавки и его консистенцию. Мы стараемся следить за изменениями, но, если вы заметили какое-либо несоответствие, пожалуйста, сообщите нам об этом в письме или в комментарии к товару. Спасибо!

**** БАД не является лекарством!

Отзывы Life Extension, Супер R-липоевая кислота, 240 мг, 60 капсул на растительной основе

  • Био усиленная формула липоевой кислоты
  • Пищевая добавка
  • Не содержит ГМО
  • Вегетарианский продукт

Результаты опубликованных исследований демонстрируют критическое значение липоевой кислоты для сохранения уровня энергии в клетках, характерного для юного возраста, путем поддержаний работы митохондрий. В отличие от других форм липоевой кислоты, супер R-липоевая кислота обладает более высокой биодоступностью, стабильностью и увеличивает уровень липоевой кислоты в крови в 10-30 раз выше, чем обычная R-липоевая кислота. Уникальный R-липоат натрия помогает достигнуть пиковой концентрации данной кислоты в плазме уже через 10-20 минут после приема. Супер R-липоевая кислота снабжает организма более активной «R» формой липоевой кислоты в отличие от других подобных добавок. Попробуйте добавку с липоевой кислотой нового поколения уже сегодня!

Краткий обзор преимуществ

  • Мощный антиоксидант, поддерживающий нормальный уровень липоата в плазме
  • Защищает организм от окислительного стресса
  • Поддерживает здоровую работу митохондрий
  • Сохраняет характерный для молодого возраста уровень клеточной энергии

Мощный антиоксидант, поддерживающий пиковый уровень в плазме

Супер R-липоевая кислота является мощным антиоксидантов, поддерживающим здоровье митохондрий, уровень клеточной энергии и защищает от окислительного стресса. В отличие от других форм липоевой кислоты, супер R-липоевая кислота обладает более высокой биодоступностью, стабильностью и увеличивает уровень липоевой кислоты в крови в 10-30 раз выше, чем обычная R-липоевая кислота.

Уникальный R-липоат натрия помогает достигнуть пиковой концентрации данной кислоты в плазме уже через 10-20 минут после приема. Супер R-липоевая кислота снабжает организма более активной «R» формой липоевой кислоты в отличие от других подобных добавок.

R липоевая кислота отличается биологической активностью

Альфа-липоевая кислота, универсальный антиоксидант, содержит две формы (изомера) R и S с очень различающимися свойствами. R форма это биологически активный компонент (знакомый организму), который несет ответственность за уникальные антиоксидантные свойства липоевой кислоты. S форма получается химическим путем и не обладает высокой биологической активностью. Добавки с альфа-липоевой кислотой обычно содержит «R» и «S» формы в пропорции 50/50. Это означает, что 100 мг добавки с альфа-липоевой кислотой снабжает организм только 50 мг биологически активной «R» формы.

Человеческий организм производит и использует «R» формы липоевой кислоты. Эта активная форма, R-липоевая кислота, активно поддерживает воспалительный ответ организма, является мощным средством для борьбы со свободными радикалами и продемонстрировала более высокую эффективность по сравнению со стандартной смесью «R» и «S» форм, которая обычно входит в состав добавок с альфа-липоевой кислотой.

Уникальный R-липоат натрия это антиоксидант нового поколения

Новая форма R-липоевой кислоты была обнаружена в ходе специальных исследований и разработок и представляет собой средство для антиоксидантной защиты «нового поколения». R-липоевая кислота продемонстрировала высочайшую биодоступность, стабильность и множество полезных свойств.

Однако с помощью нашего революционного процесса мы превращаем биологически активную «R» форму липоевой кислоты в R-липоат натрия, который в ходе недавних исследований продемонстрировал способность обеспечивать более высокий уровень липоевой кислоты в крови, по сравнению с обычной R-липоевой кислотой.

Эта новая форму с липоевой кислотой не только обеспечивает пиковый уровень кислоты в крови,13 но и действуют быстрее, обеспечивая быструю доставку из плазмы в ткани. Исследование показало, что при приеме внутрь Супер R-липоевой кислоты при превращении в R-липоат натрия пиковая концентрация в плазме наблюдается уже через 10-20 минут после приема.

Улучшенная антиоксидантная способность посредством высокой стабильности и эффективности

В отличие от других форм липоевой кислоты, Супер R-липоевая кислота более стабильна внутри организма. Эта повышенная стабильность является причиной высокой абсорбции и биодоступности по сравнению со стандартной R-липоевой кислотой.

Мощное антиоксидантное действие R-липоевой кислоты хорошо известно и дополняется поддержкой работы митохондрий. Супер R-липоевая кислота от Now обладает еще большей эффективностью для поддержания высокого уровня клеточной энергии.

R-Липоевая Кислота, R-Lipoic Acid, Thorne Research, 60 капсул

Рекомендуется при:

  • расстройствах нервной системы
  • нарушениях памяти
  • депрессии
  • ослабленном иммунитете
  • упадке сил

Показания к применению

Принимать по 1 капсуле 1-2 раза в день или по назначению лечащего врача.

Что это?

R-Липоевая кислота — это мощный антиоксидант, активная форма альфа-липоевой кислоты. Данная форма легко усваивается, поддерживает здоровье печени, нервной системы, зрения.

Как это работает?

R-Липоевая кислота является мощным жировым и водорастворимым антиоксидантом. Она также является важным компонентом процесса производства энергии в клетках. Основная роль R-липоевой кислоты – это устранение действия свободных радикалов, которые присутствуют во всем организме. Именно они являются причинами многих заболеваний нервной системы, а также таких болезней, как Альцгеймер. R-липоевая кислота усиливает свое антиоксидантное действие еще и тем, что усиливает свойства витамина С и Е. Это способствует образованию в клетках организма глутатиона – важного кофермента иммунной системы.

Отказ от ответственности

Интернет-магазин VitaWorld старается во всех случаях предоставлять объективную и подлинную информацию о представленной продукции и об изображениях. Тем не менее, производитель может вносить изменения, относящиеся к составу или упаковке, которые займут некоторое время до того, как они будут обнародованы на сайте. Примите к сведению, даже если упаковка продукта подлежит изменениям, — это абсолютно не влияет на свежесть и качество товара. Мы призываем вас сосредоточенно изучить указанные данные на упаковке, инструкцию и предупреждения перед началом использования продуктов, не полагайтесь только на информацию, которая была размещена на сайте VitaWorld.


R-Липоевая Кислота, R-Lipoic Acid, Thorne Research, 60 капсул — гарантия от проверенных производителей

На сайте https://vitaworld.com.ua/ Вы сможете подобрать и купить R-Липоевая Кислота, R-Lipoic Acid, Thorne Research, 60 капсул. Также по нормальной цене есть большой выбор биодобавок и витаминов: витамины для активной работы мозга. Если Вы решили купить липоевую кислоту от лучших производителей — добавляйте в корзину товар и укажите удобный метод доставки и оплаты. Мы осуществялем доставку в Хмельницкий и по остальным регионам. В ассортименте товара также есть витамин д3 1000 ме, цена доступна для каждого. Стоит напомнить, что для постоянных клиентов действуют постоянные скидки.

R-Липоевая Кислота, R-Lipoic Acid, Thorne Research, 60 капсул — возможность покупки проверенных брендов

В онлайн-магазине есть возможность выбрать витамины разных производителей, один из которых — Bluebonnet Nutrition. Рекомендуем рассмотреть одну из востребованных позиций: препараты для железа и витамин б2, купить можно всего в пару кликов на сайте. У нас самые необходимые витамины, например, д3 к2. Если Вы еще на стадии выбора и Вам нужна консультация, связаться можно по номеру на сайте в разделе «Обратная связь».

Напишите ваш собственный отзыв

Life Extension, Супер R-липоевая кислота, 240 мг, 60 вегетарианских капсул

Life Extension, Супер R-липоевая кислота, 240 мг, 60 вегетарианских капсул

Описание

  • Активная форма липоевой кислоты Bio-Enhanced

  • Биологически активная добавка

  • Не содержит ГМО

  • Подходит для вегетарианцев

Результаты опубликованных исследований демонстрируют критическое значение липоевой кислоты для сохранения уровня энергии в клетках, характерного для молодого возраста, путем поддержания здоровой митохондриальной функции. В отличие от других форм липоевой кислоты, супер R-липоевая кислота обладает более высокой биологической доступностью, стабильностью и увеличивает уровень липоевой кислоты в крови в 10–30 раз больше, чем обычная R-липоевая кислота. Этот уникальный R-липоат натрия помогает достигнуть пиковой концентрации данной кислоты в плазме уже через 10–20 минут после приема. Супер R-липоевая кислота снабжает организм более активной «R» формой липоевой кислоты, чем другие аналогичные добавки. Попробуйте эту добавку с липоевой кислотой нового поколения уже сегодня!

Краткий обзор преимуществ

  • Мощный антиоксидант, поддерживающий нормальный уровень липоата в плазме

  • Защищает организм от окислительного стресса

  • Поддерживает нормальную работу митохондрий

  • Сохраняет характерный для молодого возраста уровень клеточной энергии

Мощный антиоксидант, поддерживающий пиковый уровень концентрации в плазме

Супер R-липоевая кислота является мощным антиоксидантом, который поддерживает здоровье митохондрий, уровень клеточной энергии и защищает организм от окислительного стресса. В отличие от других форм липоевой кислоты, супер R-липоевая кислота обладает более высокой биодоступностью, стабильностью и увеличивает уровень липоевой кислоты в крови в 10–30 раз больше, чем обычная R-липоевая кислота.

Этот уникальный R-липоат натрия помогает достигнуть пиковой концентрации данной кислоты в плазме уже через 10–20 минут после приема. Супер R-липоевая кислота снабжает организм более активной «R» формой липоевой кислоты, чем другие аналогичные добавки.

Форма “R” липоевой кислоты отличается высокой биологической активностью

Альфа-липоевая кислота, универсальный антиоксидант, содержит две формы (изомера) — R и S — с очень различающимися свойствами. Форма “R“ — это биологически активный компонент (знакомый организму), который отвечает за уникальные антиоксидантные свойства липоевой кислоты. Форма “S“ получается химическим путем и не обладает очень высокой биологической активностью. Добавки с альфа-липоевой кислотой обычно содержат формы “R“ и “S“ в пропорции 50/50. Это означает, что 100 мг добавки с альфа-липоевой кислотой снабжают организм только 50 мг биологически активной “R“ формы.

Человеческий организм производит и использует форму “R“ липоевой кислоты. Эта активная форма, R-липоевая кислота, активно поддерживает нормальную воспалительную реакцию организма, является мощным средством для борьбы со свободными радикалами и продемонстрировала более высокую эффективность по сравнению со стандартной смесью форм «R» и «S», которая обычно входит в состав добавок с альфа-липоевой кислотой.

Уникальный R-липоат натрия — это антиоксидант нового поколения

Новая форма R-липоевой кислоты была обнаружена в ходе специальных исследований и разработок и представляет собой средство для антиоксидантной защиты нового поколения. R-липоевая кислота продемонстрировала высочайшую биодоступность, стабильность и множество других полезных свойств.

Однако с помощью нашего революционного процесса мы превращаем биологически активную «R» форму липоевой кислоты в R-липоат натрия, который в ходе недавних исследований продемонстрировал способность обеспечивать более высокий уровень липоевой кислоты в крови, чем обычная R-липоевая кислота.

Эта новая форма с липоевой кислотой не только обеспечивает пиковый уровень кислоты в крови, но и действует быстрее, в ускоренном темпе доставляя кислоту из плазмы в ткани. Исследование показало, что при приеме супер R-липоевой кислоты пиковая концентрация в плазме наблюдается уже через 10–20 минут после приема при превращении в R-липоат натрия.

Улучшенная антиоксидантная активность благодаря высокой стабильности и эффективности

В отличие от других форм липоевой кислоты супер R-липоевая кислота более стабильна внутри организма. Эта повышенная стабильность обеспечивает более высокую абсорбцию и биодоступность по сравнению с обычной R-липоевой кислотой.

Благодаря мощному антиоксидантному действию R-липоевая кислота также обеспечивает поддержку работы митохондрий. Супер R-липоевая кислота от Now обладает еще большей эффективностью для поддержания высокого уровня клеточной энергии.

Рекомендации по Применению

Прочтите всю информацию на этикетке и в точности выполняйте рекомендации по применению.

Принимать по одной (1) или две (2) капсулы в день в зависимости от переносимости или в соответствии с рекомендациями врача. Следует принимать капсулы в одно и

Другие Ингредиенты

Микрокристаллическая целлюлоза, растительная целлюлоза (капсула), стеариновая кислота.

Предупреждения

Предупреждение. Следует проконсультироваться с врачом перед началом применения данного продукта, если вы принимаете глюкозоснижающие препараты.

Хранить в плотно закрытой упаковке в сухом и прохладном месте.

  • Хранить в недоступном для детей месте

  • Не следует превышать рекомендуемую дозировку

  • Не следует приобретать продукт, если наружная защитная пленка повреждена или отсутствует.

  • Проконсультируйтесь с врачом перед применением биологически активных добавок, если вы проходите курс лечения от какого-либо заболевания, беременны или кормите грудью.

Информация о добавке
Размер порции: 1 вегетарианская капсула
  Состав 1 порции % от суточной нормы
Натрий 30 мг 1%
Стабилизированный R-липоат натрия Bio-Enhanced Na-RALA (предоставляет 240 мг R-липоевой кислоты) 300 мг **
** Суточная норма не определена.

R-липоевая кислота, полезная для здоровья: belo_boka — LiveJournal

R-липоевая кислота — биологически активная форма липоевой кислоты. Добавка приводит в норму баланс окислительных и восстановительных процессов и является признаным официальным лекарством от диабета, болезней печени, сердца и сосудов,  средством снижения веса.

Липоевая кислота (альфа-липоевая кислота, r-липоевая кислота, тиоктовая кислота, АЛК) – жирная кислота, которая содержится в митохондриях и принимает участие в энергетическом обмене.

Отличие тиоктовой кислоты от других жирных кислот состоит в том, что ее антиоксидантные свойства сохраняются как в водной, так и жировой среде; как в окисленной, так и в восстановленной формах. Это отличает ее от водорастворимого витамина С и жирорастворимого антиоксиданта — витамина Е. Добавка повышает уровень глутатиона и коэнзима Q10 в межклеточном пространстве и усиливает процесс гликозилирования белка.

Область применения альфа-липоевой кислоты:
— инсулинорезистентность
— сахарный диабет 2 типа
— дислипидемия и атеросклероз (профилактика и лечение)
— заболевания печени любой этиологии
— пожилой возраст
— хронический стресс
— избыточный радиационный фон
— тяжелые инфекции, отравления тяжелыми металлами
— полиневропатии любой этиологии

Thorne Research, R-липоевая кислота, 60 вегетарианских капсул

R-липоевая кислота является активным изомером альфа-липоевой кислоты и лучше всего усваивается организмом. Thorne использует R-липоевую кислоту, связанную с натрием, что дополнительно повышает ее стабильность и усваиваемость. Добавка обеспечивает защиту организма от различных окислений и воспалений. Защищает от заболеваний сердца, печени, диабета и ухудшения неврологического здоровья с возрастом.

В 1 капсуле содержится 100 мг R-липоевой кислоты. R-липоевая кислота — биологически активная форма липоевой кислоты, обладающая большей активностью по сравнению с альфа-липоевой кислотой. R-липоевая кислота не раздражает желудок, поэтому я выбрала эту форму.

Доза приема может быть в двое меньше, по сравнению с альфа-липоевой, и 100 мг для профилактики достаточно. Я принимала добавку по 1 капсуле 2 раза в день. При приеме следует учитывать, что АЛК, освобождая организм от вредных веществ, может прихватить с собой  и полезные — поэтому надо развести эту добавку с магнием, железом, кальцием, калием и т.д., как минимум на 2 часа.

Добавка нужная и полезная, надо бы ее почаще заказывать, но цена у добавки не совсем гуманная. Поэтому ограничиваюсь курсом 1 месяц  два раза в год. И да, вместе с липоевой кислотой желательно принимать L-карнитин — он способствует большей эффективности АЛК. Карнитин можно заказать в порошковой форме, с целью экономии средств.

Метаболические эффекты добавок α-липоевой кислоты у преддиабетиков: рандомизированное плацебо-контролируемое пилотное исследование

Добавление укрепляющих здоровье нутрицевтиков может быть эффективным дополнением к другим подходам к образу жизни и лекарствам для предотвращения прогрессирования заболевания у преддиабетических субъектов. α-Липоевая кислота, встречающаяся в природе короткоцепочечная жирная кислота, была тщательно изучена на предмет ее антиоксидантных и гликемических свойств, но редко исследовалась как стратегия снижения липидов.Мы провели пилотное исследование, чтобы изучить влияние добавок α-липоевой кислоты на гликемический контроль и липидный профиль у взрослых с преддиабетом, избыточным весом / ожирением. Исследование было разработано как свободно живущее, рандомизированное, двухфазное, плацебо-контролируемое перекрестное исследование с 12 пациентами с преддиабетом и дислипидемией. Подходящие субъекты прошли две тридцатидневные фазы (в случайном порядке), состоящие из плацебо (600 мг целлюлозы в день) и лечения α-липоевой кислотой (600 мг в день -1 ). Хотя без изменений ( р <0.05) в сыворотке глюкозы, субъекты, принимавшие α-липоевую кислоту, продемонстрировали снижение уровня инсулина в сыворотке натощак ( p = 0,04) и HOMA-IR ( p = 0,07) по сравнению с группой плацебо. Однако никаких изменений ( p > 0,05) липидов сыворотки (включая общий холестерин, ХС-ЛПНП, ХС-ЛПВП, триглицериды, ХС-ЛПНП / ХС-ЛПВП и ОС / ХС-ЛПВП) не наблюдалось. Результаты исследования показывают, что добавление α-липоевой кислоты может быть полезной стратегией для улучшения чувствительности к инсулину у преддиабетических субъектов, но неэффективно для регулирования липидов сыворотки.

У вас есть доступ к этой статье

Подождите, пока мы загрузим ваш контент… Что-то пошло не так. Попробуйте снова?

Лечение симптоматической диабетической периферической нейропатии антиоксидантом α-липоевой кислотой

  • 1.

    Группа исследования контроля диабета и его осложнений (1995) Влияние интенсивной терапии диабета на развитие и прогрессирование нейропатии.Ann Intern Med 122: 561–568

    Google ученый

  • 2.

    Ziegler D, Mayer P, Mühlen H, Gries FA (1991) Естественная история дисфункции соматосенсорных и вегетативных нервов в связи с гликемическим контролем в течение первых 5 лет после постановки диагноза диабета типа 1 (инсулинозависимого) mellitus. Диабетология 34: 822–829

    PubMed Google ученый

  • 3.

    Ziegler D, Dannehl K, Wiefels K, Gries FA (1992) Дифференциальные эффекты почти нормогликемии в течение 4 лет на дисфункцию соматических нервов и изменение частоты сердечных сокращений у пациентов с диабетом 1 типа.Диабет Мед 9: 622: 629

    Google ученый

  • 4.

    Kennedy WR, Navarro X, Goetz FC, Sutherland DER, Najarian JS (1990) Влияние трансплантации поджелудочной железы на диабетическую невропатию. N Engl J Med 322: 1031–1037

    PubMed Google ученый

  • 5.

    Макс М.Б., Линч С.А., Мюир Дж., Шоаф С.Е., Смоллер Б., Дубнер Р. (1992) Эффекты дезипрамина, амитриптилина и флуоксетина на боль при диабетической невропатии.N Engl J Med 326: 1250–1256

    PubMed Google ученый

  • 6.

    Sindrup SH (1994) Антидепрессанты в лечении симптомов диабетической невропатии. Фармакодинамические, -кинетические и -генетические аспекты. Дэн Мед Булл 41: 66–78

    PubMed Google ученый

  • 7.

    Генри JA, Александр CA, Sener EK (1995) Относительная смертность от передозировки антидепрессантов. BMJ 310: 221–224

    PubMed Google ученый

  • 8.

    Stracke H, Meyer UE, Schumacher HE, Federlin K (1992) Мексилетин в лечении диабетической невропатии. Уход за диабетом 15: 1550–1555

    PubMed Google ученый

  • 9.

    Группа исследования капсаицина (1991) Лечение болезненной диабетической невропатии с помощью местного капсаицина. Многоцентровое двойное слепое исследование, контролируемое транспортными средствами. Arch Intern Med 151: 2225–2229

    Google ученый

  • 10.

    Levy DM, Abraham RR, Tomlinson DR (1991) Актуальный капсаицин в лечении болезненной диабетической невропатии. N Engl J Med 324: 776

    PubMed Google ученый

  • 11.

    Masson EA, Boulton AJM (1990) Ингибиторы альдозоредуктазы в лечении диабетической невропатии. Обзор обоснования и клинических данных. Наркотики 39: 190–202

    PubMed Google ученый

  • 12.

    Ziegler D, Mayer P, Rathmann W, Gries FA (1991) Годовое лечение ингибитором альдозоредуктазы, понал-рестатом, при диабетической невропатии. Диабет Res Clin Pract 14: 63–74

    PubMed Google ученый

  • 13.

    Gregersen G (1987) Добавка мио-инозита. В: Dyck PJ, Thomas PK, Asbury AK, Winegrad AI, Porte D (eds) Диабетическая невропатия. Сондерс, Филадельфия, стр. 188–189

    Google ученый

  • 14.

    Kihara M, Schmelzer JD, Poduslo JF et al. (1991) Влияние аминогуанидина на нервный кровоток, проницаемость сосудов, электрофизиологию и свободные радикалы кислорода. Proc Natl Acad Sci USA 88: 6107–6111

    PubMed Google ученый

  • 15.

    Thomas PK (1994) Факторы роста и диабетическая невропатия. Diabet Med 11: 732–739

    PubMed Google ученый

  • 16.

    Cameron NE, Cotter MA (1993) Возможные терапевтические подходы к лечению или профилактике диабетической невропатии: данные экспериментальных исследований.Диабет Мед 10: 593–605

    PubMed Google ученый

  • 17.

    Джамал Г.А. (1994) Использование гамма-линоленовой кислоты в профилактике и лечении диабетической невропатии. Diabet Med 11: 145–149

    PubMed Google ученый

  • 18.

    Quatraro A, Roca P, Donzella C, Acampora R, Marfella R, Giugliano D (1995) Ацетил-1-карнитин для симптоматической диабетической невропатии. Диабетология 38: 123 (Письмо)

    Google ученый

  • 19.

    Low PA, Никандер К.К. (1991) Действие свободных радикалов кислорода в седалищном нерве при экспериментальном диабете. Диабет 40: 873–877

    PubMed Google ученый

  • 20.

    Никандер К.К., Шмельцер Д.Д., Ровер Д.А., Лоу ПА (1994) Влияние дефицита альфа-токоферола на показатели окислительного стресса в нормальных и диабетических периферических нервах. J Neurol Sci 126: 6–14

    PubMed Google ученый

  • 21.

    Cameron NE, Cotter MA (1994) Связь сосудистых изменений с метаболическими факторами при сахарном диабете и их роль в развитии осложнений со стороны периферических нервов. Diab Metab Ред. 10: 189–224

    Google ученый

  • 22.

    Suzuki YJ, Tsuchiya M, Packer L (1991) Тиоктовая кислота и дигидролипоевая кислота — новые антиоксиданты, которые взаимодействуют с активными формами кислорода. Free Rad Res Comms 15: 255–263

    Google ученый

  • 23.

    Bravenboer B, Kappelle AC, Hamers FPT, van Buren T, Erkelens DW, Gispen W (1992) Возможное использование глутатиона для профилактики и лечения диабетической невропатии у крыс с диабетом, индуцированным стрептозотоцином. Диабетология 35: 813–817

    PubMed Google ученый

  • 24.

    Cameron NE, Cotter MA, Maxfield EK (1993) Лечение антиоксидантами предотвращает развитие дисфункции периферических нервов у крыс, страдающих стрептозотоцином.Диабетология 36: 299–304

    PubMed Google ученый

  • 25.

    Cameron NE, Cotter MA, Archibald V, Dines KC, Maxfield EK (1994) Антиоксидантные и прооксидантные эффекты на скорость нервной проводимости, эндоневральный кровоток и напряжение кислорода у недиабетиков и стрептозотоциновых диабетиков. крысы. Диабетология 37: 449–459

    Статья. PubMed Google ученый

  • 26.

    Karasu C, Dewhurst M, Stevens EJ, Tomlinson DR (1995) Эффекты антиоксидантного лечения на дисфункцию седалищного нерва у крыс с диабетом, страдающим стрептозотоцином; сравнение с незаменимыми жирными кислотами.Диабетология 38: 129–134

    PubMed Google ученый

  • 27.

    Nagamatsu M, Nickander KK, Schmelzer JD et al. (1995) Липоевая кислота улучшает нервный кровоток, снижает окислительный стресс и улучшает проводимость дистальных нервов при экспериментальной диабетической невропатии. Уход за диабетом 18: 1160–1167

    PubMed Google ученый

  • 28.

    Ziegler D, Mayer P, Mühlen H, Gries FA (1993) Effekte einer Therapie mit α-LiponsÄure gegenüber Vitamin B 1 bei der diabetischen Neuropathie.Диаб Штоффв 2: 443–448

    Google ученый

  • 29.

    Скотт Дж., Huskisson EC (1976) Графическое изображение боли. Боль 2: 175–184

    PubMed Google ученый

  • 30.

    Young MJ, Boulton AJM, Macleod AF, Williams DRR, Sonksen PH (1993) Многоцентровое исследование распространенности диабетической периферической нейропатии в клиниках Соединенного Королевства. Диабетология 36: 150–154

    PubMed Google ученый

  • 31.

    Hoppe F (1991) Hamburger Schmerz Adjektiv Liste (HSAL). Руководство по эксплуатации. Beltz-Verlag, Вайнхайм

    Google ученый

  • 32.

    Шейнер Л.Б., Рубин Д.Б. (1995) Анализ намерения лечить и цели клинических испытаний. Clin Pharmacol Ther 57: 6–15

    PubMed Google ученый

  • 33.

    Schulz B, Reichel G, Hüttl I, Zander E, Runge U (1986) Zur Wirksamkeit der ThioctsÄuretherapie bei Typ-I-Diabetikern.Wiss Z Ernst-Moritz-Arndt-UniversitÄt Greifswald, Medizinische Reihe 35: 48–50

    Google ученый

  • 34.

    Jörg J, Metz F, Scharafinski H (1988) Zur medikamentösen Behandlung der diabetischen Polyneuropathie mit der Alpha-LiponsÄure oder Vitamin B-PrÄparaten. Нервенарцт 59: 36–44

    PubMed Google ученый

  • 35.

    Sachse G, Willms B (1980) Эффективность тиоктовой кислоты в терапии периферической диабетической невропатии.В: Gries FA, Freund HJ, Rabe F, Berger H (eds) Аспекты вегетативной невропатии при диабете. Horm Metab Res [Suppl Series] 9: 105–108

  • 36.

    Cavaliere D, Scorpiglione N, Belfiglio M et al. (1994) Оценка качества рандомизированных клинических испытаний медикаментозного лечения диабетической невропатии. Диаб Нутр Метаб 7: 287–294

    Google ученый

  • 37.

    Young RJ, Ewing DJ, Clarke BF (1983) Контролируемое испытание сорбинила, ингибитора альдозоредуктазы, при хронической болезненной диабетической невропатии.Диабет 32: 938–942

    PubMed Google ученый

  • 38.

    Judzewitsch RG, Jaspan JB, Polonsky KS et al. (1983) Ингибирование альдозоредуктазы улучшает скорость нервной проводимости у пациентов с диабетом. N Engl J Med 308: 119–125

    PubMed Google ученый

  • 39.

    Young RR, Shahani BT (1983) Скорость нервной проводимости при диабете. N Engl J Med 308: 190–191

    Google ученый

  • 40.

    Santiago JV, Sönksen PH, Boulton AJM et al. (1993) Отмена ингибитора альдозоредуктазы толрестата у пациентов с диабетической невропатией: влияние на нервную функцию. J Diab Comp 7: 170–178

    Google ученый

  • 41.

    Dimpfel W, Spüler M, Pierau F-K, Ulrich H (1990) Тиоктовая кислота индуцирует дозозависимое разрастание нейритов в культивируемых клетках нейробластомы крысы. Dev Pharmacol Ther 14: 193–199

    PubMed Google ученый

  • 42.

    Kemplay S, Martin P, Wilson S (1988) Влияние тиоктовой кислоты на двигательные нервные окончания у крыс, отравленных акриламидом. Neuropathol Appl Neurobiol 14: 275–288

    PubMed Google ученый

  • 43.

    Altenkirch H, Stoltenburg-Didinger G, Wagner HM, Herrmann J, Walter G (1990) Эффекты липоевой адиковой кислоты при невропатии, вызванной гексакарбоном. Нейротоксикол Тератол 12: 619–622

    PubMed Google ученый

  • 44.

    Halliwell B (1994) Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека: любопытство, причина или следствие? Ланцет 344: 721–724

    PubMed Google ученый

  • 45.

    Jenner P (1994) Окислительное повреждение при нейродегенеративном заболевании. Ланцет 344: 796–798

    PubMed Google ученый

  • 46.

    Baynes JW (1991) Роль окислительного стресса в развитии осложнений диабета.Диабет 40: 405–412

    PubMed Google ученый

  • 47.

    Collier A, Rumley A, Rumley AG et al. (1992) Активность свободных радикалов и гемостатические факторы у пациентов с NIDDM с микроальбуминурией и без нее. Диабет 41: 909–913

    PubMed Google ученый

  • 48.

    Yoshida K, Hirokawa J, Tagami S, Kawakami Y, Urata Y, Kondo T (1995) Ослабленная активность клеток по нейтрализации окислительного стресса при сахарном диабете: регулирование синтеза и оттока глутатиона.Диабетология 38: 201–210

    PubMed Google ученый

  • 49.

    Kihara M, Low PA (1995) Нарушение вазореактивности к оксиду азота при экспериментальной диабетической невропатии. Экспериментальная неврология 132: 180–185

    PubMed Google ученый

  • Мета-анализ рандомизированных контролируемых исследований

    Цель . Мы провели систематический обзор литературы, чтобы оценить влияние альфа-липоевой кислоты на симптоматическую периферическую нейропатию у пациентов с сахарным диабетом. Дизайн и методы исследования . В базах данных MEDLINE и EMBASE был выполнен поиск по ключевым словам «липоевая кислота», «тиоктовая кислота», «диабет *» и MeSH-терминам «тиоктовая кислота» и «сахарный диабет». Были отобраны рандомизированные контролируемые испытания, в которых в качестве критерия исхода использовался показатель TSS, и была проведена оценка их методологического качества. Отбор исследований и оценка качества проводились независимо тремя наблюдателями. Результатов . В целом, объединенная стандартизованная разница средних значений, полученная во всех испытаниях, показала снижение оценки TSS на -2.26 (ДИ: от -3,12 до -1,41;) в пользу введения альфа-липоевой кислоты. Анализ подгрупп перорального введения (-1,78 ДИ: -2,45 до -1,10;) и внутривенного введения (-2,81 ДИ: от -4,16 до -1,46;) подтвердил надежность общего результата. Выводы . При внутривенном введении в дозе 600 мг / день в течение 3 недель альфа-липоевая кислота приводит к значительному и клинически значимому снижению нейропатической боли (степень рекомендации A). Неясно, являются ли значительные улучшения, наблюдаемые после 3-5 недель перорального приема в дозировке > 600 мг / день, клинически значимыми.

    1. Введение

    Невропатия — микрососудистое осложнение сахарного диабета, которое приводит к значительной заболеваемости и снижению качества жизни [1]. Периферическая невропатия может проявляться покалыванием, жжением, болью, спазмами, парестезией или онемением. Имеются неопровержимые доказательства того, что развитие микрососудистых осложнений связано с уровнем дисрегуляции глюкозы в течение длительного периода времени [2]. Гипергликемия вызывает повышенное производство свободных радикалов кислорода в митохондриях (окислительный стресс), что приводит к активации четырех известных путей, ответственных за гипергликемическое повреждение: пути полиола, гексозамина, протеинкиназы С и AGE [3].Это приводит к повреждению эндотелиальных и нервных клеток.

    Невропатическая боль трудно поддается лечению, а стандартные анальгетики обычно недостаточно эффективны [4]. Лекарства, которые в настоящее время используются для лечения нейропатической боли у пациентов с диабетом, включают, в основном, антидепрессанты, противоэпилептические средства и опиоиды. Эти препараты ограничены по своей эффективности, имеют значительные побочные эффекты и не влияют на процессы, посредством которых гипергликемия приводит к повреждению клеток [5].Антиоксиданты, такие как альфа-липоевая кислота, теоретически могут быть эффективными при лечении диабетической невропатии. В 1951 году альфа-липоевая кислота была идентифицирована как кофермент в цикле трикарбоновых кислот (цикл Кребса) [6]. Альфа-липоевая кислота также является мощным антиоксидантом, который, как сообщается, снижает и предотвращает диабетические микро- и макрососудистые осложнения на животных моделях [7, 8]. Недавнее исследование на людях с сахарным диабетом 1 типа показало нормализацию повышенного образования AGE и снижение пути гексозамина [9].Предотвращая повреждение, вызванное гипергликемией, альфа-липоевая кислота может быть не только обезболивающим, но и улучшать функцию нервов. Кроме того, недавние данные показывают, что альфа-липоевая кислота снижает чувствительность нейронов к боли, избирательно подавляя нейрональные кальциевые каналы Т-типа [10]. Более того, по сравнению с лекарствами, которые используются в настоящее время, альфа-липоевая кислота имеет мало побочных эффектов [11]. В Германии альфа-липоевая кислота одобрена для лечения диабетической нейропатической боли и покрывается медицинскими страховыми компаниями, но в других странах ее применение не получило широкого распространения.

    Предыдущий метаанализ четырех рандомизированных контролируемых испытаний (РКИ) альфа-липоевой кислоты (600 мг / день) у пациентов с диабетом и невропатической болью показал, что три недели лечения с внутривенным введением альфа-липоевой кислоты (600 мг / день) привели к к значительному уменьшению сообщаемой нейропатической боли [12]. Однако исследования, изучающие эффект перорального приема, не были включены. Кроме того, метаанализ не соответствовал Кокрановским методологическим критериям систематических обзоров.Протокол предлагаемого систематического обзора можно найти в Кокрановской библиотеке [13]. Недавно мы провели качественный систематический обзор литературы [14]. Кроме того, нашей целью было расширить поиск литературы и провести количественный метаанализ. Целью этого метаанализа было оценить эффекты внутривенного и перорального введения альфа-липоевой кислоты по сравнению с плацебо у пациентов с симптоматической периферической диабетической нейропатией.

    2. Дизайн и методы исследования
    2.1. Поиск литературы

    В ноябре 2010 г. трое из авторов (GSM, AA и NK) провели поиск соответствующих публикаций в электронной базе данных MEDLINE, используя поисковую систему PubMed и EMBASE. Стратегия поиска, используемая в MEDLINE, использовала термины «липоевая кислота», «тиоктовая кислота» и «диабет *» и термины MeSH «тиоктовая кислота» и «сахарный диабет»: (((липоевая кислота ИЛИ тиоктовая кислота ИЛИ тиоктовая кислота [ MeSH]) И (диабет * ИЛИ диабет * ИЛИ диабет * ИЛИ сахарный диабет [MeSH])) И ((клиническое [название / реферат] И испытание [название / реферат]) ИЛИ клинические испытания [термины MeSH] ИЛИ клиническое испытание [публикация Тип] ИЛИ случайное * [Название / Аннотация] ИЛИ случайное распределение [Термины MeSH] ИЛИ терапевтическое использование [Подзаголовок MeSH])).Аналогичная стратегия поиска использовалась в EMBASE: ((липоевая кислота ИЛИ тиоктовая кислота) И (сахарный диабет ИЛИ диабет *) И ([Кокрановский обзор] / lim OR [контролируемое клиническое исследование] / lim OR [метаанализ] / lim OR [ рандомизированное контролируемое исследование] / lim OR [систематический обзор] / lim)). Все авторы получили одинаковые результаты.

    2.2. Выбор исследования

    Для выбора исследования были использованы следующие критерии включения: (1) РКИ по альфа-липоевой кислоте, (2) исследуемая популяция, состоящая из пациентов с сахарным диабетом и периферической нейропатической болью, и (3) использование всего симптома. балл (TSS) как показатель результата.Язык не был ограничением. GSM, AA и NK независимо друг от друга определили исследования, которые должны быть включены в обзор, проверив названия и отрывки, загруженные из баз данных. Затем было проведено консенсусное совещание для разрешения любых разногласий. Окончательное решение о включении или исключении какого-либо исследования принималось на основе полного текста статьи. Списки литературы идентифицированных исследований были пересмотрены для выявления дополнительных потенциально подходящих исследований. Неопубликованные данные и материалы конференций были исключены из этого обзора.

    2.3. Методологическая оценка качества

    Вышеупомянутые авторы приступили к независимой оценке качества каждого исследования, используя стандартизированную форму оценки для РКИ и систематических обзоров, разработанных Голландским Кокрановским центром (http://www.cochrane.nl/) (Таблица 1). Уровни доказательности и оценки рекомендаций применялись в соответствии с Оксфордским центром доказательной медицины, версия 2001 г. (http://www.cebm.net/index.aspx?o=1025/).

    SYDNEY 8




    4. Показатель результата

    Первичным показателем результата в этом метаанализе был общий балл симптомов (TSS). TSS — это опросник, в котором пациента просят оценить интенсивность (отсутствие, легкая, умеренная, тяжелая) и частоту (время от времени, часто, непрерывную) четырех симптомов (боль, жжение, парестезия, онемение), приводящих к шкала баллов, в которой 0 означает отсутствие симптомов, а 14,64 означает, что все четыре симптома тяжелые и присутствуют более или менее постоянно (таблица 2). 30% изменение этой шкалы считается клинически значимым (или ≥2 балла у пациентов с начальным баллом ≤4 балла) [15].


    Ziegler 1995 [15] ALADIN Ruhnau 1999 [16] ORPIL Ametov 2003 [17] 903 SYGLEREY 2006 2
    (1) Рандомизация? да да да да
    (2) Скрытие распределения? да да да да
    (3) Пациенты ослеплены? да да да да
    (4) Врачи ослепили? да да да да
    (5) Следователи ослепили? НЕТ НЕТ НЕТ НЕТ
    (6) Группы, сопоставимые на исходном уровне? да да да да
    (7) Последующее наблюдение завершено у> 80% пациентов? да да да да
    (8) Анализ «от намерения к лечению»? да да да да
    Уровень доказательности 1b 1b 1b 1b
    2,00

    Частота симптома Интенсивность симптома
    Отсутствует Незначительная Умеренная Тяжелая
    3,00
    Часто 0 1,33 2,33 3,33
    (Почти) непрерывно 0 1.66 2,66 3,66

    2,5. Статистический анализ

    Для целей этого мета-анализа общие результаты, основанные на показателях TSS, были объединены для перорального и внутривенного введения альфа-липоевой кислоты и плацебо. Мета-анализ проводился с использованием программного обеспечения RevMan5 (The Nordic Cochrane Center, The Cochrane Collaboration). Статистические данные использовались для оценки статистической неоднородности [19]. Считалось, что знак означает неоднородность.Модель случайного эффекта использовалась в случае неоднородности, модель фиксированного эффекта при отсутствии неоднородности. Метод обратной дисперсии использовался для взвешивания оценок отдельных исследований. Когда это было возможно, с авторами исследования связывались для уточнения данных. Исследования исключались из метаанализа, если было предоставлено недостаточно информации для расчета стандартной ошибки. Впоследствии для оценки объединенных эффектов был применен метод Mantel – Haenszel. Чтобы проверить надежность наших результатов, мы провели следующие, априори определенные анализы подгрупп: внутривенное и пероральное введение альфа-липоевой кислоты по сравнению с плацебо.

    Мы придерживались руководящих принципов QUOROM по отчетности метаанализов рандомизированных исследований [20].

    3. Результаты
    3.1. Идентификация и выбор исследований

    В результате поиска было обнаружено 242 публикации в Medline и 112 в Embase (рис. 1). 112 публикаций, найденных в Embase, также были идентифицированы в Medline. После обзора названий и выдержек из 242 публикаций было отобрано 10 рандомизированных плацебо-контролируемых исследований альфа-липоевой кислоты у пациентов с диабетической нейропатической болью [15–18, 21–26].После прочтения полных статей два исследования были исключены [21, 22], поскольку они касались влияния альфа-липоевой кислоты на вегетативную, а не на диабетическую нейропатию. Два исследования [23, 24] были исключены, потому что TSS не использовался в качестве критерия исхода. Среди составителей обзора не было разногласий относительно исследований, отобранных для включения.


    3.2. Методологическая оценка качества

    Обзор методологической оценки качества представлен в таблице 1.Четыре РКИ [15–18] имели хорошее методологическое качество (уровень 1b). Два РКИ [25, 26] имели существенные методологические ограничения (уровень 2b). В исследовании Liu et al. [26] был исключен из нашего метаанализа из-за неприемлемых методологических ограничений, включая отсутствие сокрытия распределения и слепоты. Исследование Ziegler et al. [25] был рассмотрен для включения, несмотря на смещение исключения из-за выборочного отказа от последующего наблюдения, но в статье предоставлено недостаточно информации для расчета стандартной ошибки.С авторами исследования связались для уточнения данных, но они не ответили на повторные запросы. Таким образом, это исследование было исключено из метаанализа.

    3.3. Описательный анализ выбранных рандомизированных контролируемых исследований

    Наконец, в наш систематический обзор и метаанализ были включены четыре РКИ. Все исследуемые группы в четырех выбранных РКИ состояли из пациентов с периферической диабетической нейропатией [15–18]. Возрастной диапазон составлял от 18 до 74 лет, и большинство включенных пациентов страдали сахарным диабетом 2 типа.Эффекты перорального введения альфа-липоевой кислоты изучались в двух исследованиях, а внутривенное введение — в двух других (таблица 3). Два исследования включали множественные сравнения доз. Дозировка альфа-липоевой кислоты составляла от 100 до 1800 мг в сутки. Альфа-липоевая кислота внутривенно вводилась в течение трех недель, а пероральное введение варьировалось от трех недель до шести месяцев.

    Тип пациента SYNEY [17] * Расчетные различия между группами вмешательства и контрольной группой: не контролируются.
    DM: сахарный диабет.
    нс: незначительно.
    TSS: Общая оценка симптомов.

    Исследование
    1-й автор, год; Название исследования
    Исследовательская группа Продолжительность исследования Дозировка альфа-липоевой кислоты Путь введения Оценка первичного результата Результаты Различие между вмешательством и контролем * (значимость) Уровень доказательности
    Количество пациентов (Вмешательство / контроль) Вмешательство Контроль

    Ziegler 1995 ALADIN [15] DM2; 18–70 лет 328 (65/63/66/66) 3 недели (a) 100 мг в день
    (b) 600 мг в день
    (c) 1200 мг в день
    Внутривенно TSS (а) 7.6 → 4,3
    (б) 7,8 → 2,8
    (в) 7,6 → 3,1
    6,8 → 4,2 −0,7 (нс)
    −2,4
    −1,9
    1b
    Ruhnau 1999 ORPIL [16] DM2; 18–70 лет 24 (12/12) 3 недели 3dd600 мг Орально TSS 7,99 → 4,24 8,18 → 6,24 −1,81 1bme DM1 + ​​DM2; 18–74 года 120 (60/60) 3 недели 600 мг в день в течение 14 дней Внутривенно TSS −5.72 -1,83 -3,89 1b
    Ziegler 2006 SYDNEY 2 [18] DM1 + ​​DM2; 18–74 года 181 (45/47/46/43) 5 недель (a) 600 мг в день
    (b) 1200 мг в день
    (c) 1800 мг в день
    Перорально TSS (а) 9,44 → 4,59
    (б) 9,40 → 4,90
    (в) 9,02 → 4,32
    9,27 → 6,35 −1,93
    −1,58
    −1,78
    1b

    Во всех исследованиях сообщалось о значительном улучшении показателей TSS. В этих исследованиях наблюдалось снижение TSS в среднем на 50% при пероральном или внутривенном введении не менее 600 мг в день. Однако по сравнению с участниками контрольных групп снижение TSS было на самом деле меньше, чем клинически значимый порог в 30% [15], так как TSS в контрольной группе также снизился.Это было особенно очевидно в исследованиях, в которых альфа-липоевая кислота вводилась перорально. В одном исследовании, в котором альфа-липоевая кислота вводилась внутривенно, группа вмешательства действительно показала снижение TSS более чем на 30% по сравнению с контрольной группой [16]. Дозировки выше 600 мг в день не привели к дальнейшему улучшению TSS и привели к увеличению частоты побочных эффектов, таких как тошнота, рвота и головокружение. Побочные эффекты, наблюдаемые при дозировке ≤600 мг в день, не отличались от наблюдаемых при приеме плацебо.Анализ безопасности лечения альфа-липоевой кислотой в течение 4 лет при диабетической полинейропатии [27] показал, что переносимость лечения и прекращение лечения из-за отсутствия переносимости не различались между группами плацебо и лечения. Однако частота серьезных нежелательных явлений была выше при приеме альфа-липоевой кислоты (38,1%), чем при приеме плацебо (28,0%) [27]. Из всех зарегистрированных нежелательных явлений только нарушения сердечного ритма и ритма наблюдались значительно чаще у пациентов, получавших альфа-липоевую кислоту, по сравнению с пациентами, получавшими плацебо (6.9% против 2,7%, 0,047) [27].

    3.4. Мета-анализ

    В целом объединенная стандартизованная разница средних значений, оцененная по всем испытаниям, показала снижение оценок TSS на -2,26 (ДИ: от -3,12 до -1,41;) в пользу введения альфа-липоевой кислоты (Таблица 4). Результаты анализа подгрупп перорального введения (-1,78 ДИ: -2,45 до -1,10;) и внутривенного введения (-2,81 ДИ: от -4,16 до -1,46;) подтвердили надежность общего результата (таблицы 5 и 6).







    4.Обсуждение. мг в день (степень рекомендации A). Однако значительные улучшения, наблюдаемые после перорального приема альфа-липоевой кислоты в течение 3-5 недель в дозе ≥600 мг в день, вероятно, не имеют клинического значения, поскольку снижение TSS фактически было меньше порогового значения 30. % считается клинически значимым.В настоящее время нет публикаций, в которых описаны эффекты длительного лечения внутривенной или пероральной липоевой кислотой.

    РКИ в основном проводятся одной немецкой исследовательской группой. Некоторые из этих исследований были многоцентровыми, в них были включены пациенты из Германии, России, Израиля и Хорватии. Предположительно, эти популяции пациентов не пересекаются. Все исследования спонсировались фармацевтической компанией, производящей альфа-липоевую кислоту.Ряд авторов получали зарплату от этой компании, кроме того, у фармацевтической компании также были представители, входящие в консультативный орган по нескольким из этих исследований.

    Поразительно, что клинически значимое влияние на невропатическую боль наблюдается уже после 3-5 недель приема альфа-липоевой кислоты. Это неожиданно быстро для антиоксидантных диетических добавок. Это можно объяснить избирательной модуляцией кальциевых каналов Т-типа нейронов альфа-липоевой кислотой [10].В исследованиях диабетической вегетативной нейропатии эффекты альфа-липоевой кислоты наблюдались через 8–16 недель [21, 22], в зависимости от дизайна исследования.

    Включенные РКИ не были разработаны для лечения нейропатической боли. Индивидуальные баллы по каждому из четырех симптомов СТШ (боль, жжение, парестезия, онемение) не были доступны из включенных исследований.

    К сожалению, пока нет опубликованных результатов его администрирования за более длительный период времени. Постоянная долгосрочная эффективность любого лечения имеет первостепенное значение при хронических состояниях, таких как диабетическая невропатия.

    В Нидерландах стоимость использования альфа-липоевой кислоты в дозировке 600 мг в день варьируется от 17,15 до 75,00 евро в месяц, в зависимости от производителя [14]. Для сравнения, стоимость амитриптилина, карбамазепина, дулоксетина, габапентина и прегабалина составляет, соответственно, 3,41, 9,38, 35,80, 53,75 и 71,71 евро в месяц (на основе налогового индекса Z, 2010 г.) [28].

    Наконец, метаанализ, вероятно, будет страдать от систематической ошибки публикации, методологических недостатков и неоднородности.Мы свели вероятность систематической ошибки к минимуму, разработав подробный протокол перед началом этого исследования, выполнив тщательный поиск опубликованных исследований и используя явные методы для выбора исследований, извлечения данных и анализа данных. Кроме того, мы изучили всю совокупность рандомизированных доказательств, включив все соответствующие рандомизированные испытания.

    Мы пришли к выводу, что внутривенное введение альфа-липоевой кислоты приводит к значительным и клинически значимым улучшениям симптоматической периферической диабетической нейропатии в краткосрочной перспективе.Представленные нами результаты достаточно обнадеживают, чтобы рассмотреть возможность внутривенного введения альфа-липоевой кислоты для лечения диабетической невропатии у пациентов, которые не реагируют на обычную терапию. Неясно, являются ли значительные улучшения, наблюдаемые при пероральном приеме альфа-липоевой кислоты, клинически значимыми. Для изучения эффектов обоих путей потребуются дополнительные более длительные исследования с использованием информативной шкалы нейропатической боли.

    Вклад авторов

    G.S. Mijnhout разработал стратегию поиска, выполнил поиск в базе данных и отбор исследований, а также методологическую оценку качества и написал рукопись; Б. Дж. Коллен отвечал за статистическую методологию исследования, выполнял статистическое объединение и редактировал рукопись; А. Альхалаф и Н. Клифстра выполнили поиск в базе данных, отбор исследований, методологическую оценку качества и отредактировали рукопись; Х. Дж. Г. Било редактировал рукопись и отвечал за критическую оценку и окончательное утверждение рукописи.Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

    Конфликт интересов

    У авторов нет конфликта интересов, о котором следует раскрывать.

    Благодарности

    Авторы выражают благодарность А. Резниченко, доктору медицины, из Центра почек, Отделение внутренней медицины, Университетский медицинский центр Гронингена, Нидерланды, за ее готовность перевести на русский язык публикацию Строкова и др. [24]. Они также благодарят Нин Цюй, доктор медицинских наук, из отделения кардиоторакальной хирургии Университетского медицинского центра Гронингена, Нидерланды, за его готовность перевести китайскую публикацию Liu et al.[26].

    Липоевая кислота при вторично прогрессирующем МС

    Реферат

    Цель: Определить, снижает ли липоевая кислота (ЛК), эндогенно продуцируемый антиоксидант, скорость атрофии всего мозга и является ли она безопасной при вторично прогрессирующем МС (ВПРС).

    Методы: Пациенты с ВПРС в возрасте 40–70 лет, включенные в одноцентровое двухлетнее двойное слепое рандомизированное исследование ежедневного перорального приема 1200 мг LA по сравнению с плацебо. Первичным результатом было изменение годового объема головного мозга в процентах (PCBV).Вторичными исходами были изменения частоты атрофии сегментированных структур головного и спинного мозга и субструктур сетчатки, инвалидность, качество жизни и безопасность. В анализе «намерение лечиться» использовались линейные смешанные модели.

    Результаты: Участие произошло в период со 2 мая 2011 г. по 14 августа 2015 г. Группы исследования LA (n = 27) и плацебо (n = 24) были сопоставлены со средним возрастом 58,5 (SD 5,9) лет, 61 % женщин, средняя продолжительность заболевания 29,6 (стандартное отклонение 9,5) лет и средний показатель расширенного статуса инвалидности 6.0 (межквартильный размах 1,75). Через 2 года среднегодовое значение PCBV было значительно меньше в группе LA по сравнению с плацебо (-0,21 [стандартная ошибка оценки коэффициента (SEE) 0,14] против -0,65 [SEE 0,10], 95% доверительный интервал [ДИ] 0,157–0,727 , п = 0,002). Улучшенная ходьба на время 25 футов была почти, но не значительно лучше в LA, чем в контрольной группе (-0,535 [SEE 0,358] против 0,137 [SEE 0,247], 95% ДИ -1,37 до 0,03, p = 0,06). У пациентов с ЛП было значительно больше желудочно-кишечных расстройств и меньше падений.Неожиданная почечная недостаточность (n = 1) и гломерулонефрит (n = 1) произошли в когорте LA. Соответствие, измеренное по количеству таблеток, составило 87%.

    Выводы: LA продемонстрировал 68% снижение годового PCBV и предположил клиническую пользу SPMS при сохранении благоприятной безопасности, переносимости и соответствия в течение 2 лет.

    Идентификатор ClinicalTrials.gov: NCT01188811.

    Классификация доказательств: Это исследование предоставляет доказательства класса I того, что у пациентов с ВПРС ЛА снижает скорость атрофии головного мозга.

    ГЛОССАРИЙ

    AE =
    нежелательное явление;
    CI =
    доверительный интервал;
    EAE =
    экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит;
    EDSS =
    Расширенная шкала статуса инвалидности;
    GI =
    желудочно-кишечный тракт;
    ITT =
    намерение лечить;
    LA =
    липоевая кислота;
    MP-RAGE =
    градиентное эхо-сигнал, подготовленный с помощью намагничивания;
    OCT =
    оптическая когерентная томография;
    PCBV =
    процент изменения объема мозга;
    ИП =
    главный исследователь;
    RRMS =
    ремиттирующий РС;
    SAE =
    серьезный AE;
    SEE =
    стандартные ошибки оценки коэффициента;
    SPMS =
    вторично-прогрессирующий MS

    К двум десятилетиям большинство с ремиттирующим рецидивирующим MS (RRMS) имеют вторично-прогрессирующий MS (SPMS).Патофизиология SPMS, вероятно, включает митохондриальную дисфункцию, активацию микроглии, нарушение эндотелия сосудов и эффекты менингеальных лимфоидных тканей. 1 Возникающая в результате нейродегенерация и ускоренная атрофия головного мозга коррелируют с функциональной инвалидностью; Таким образом, атрофия всего мозга является в настоящее время золотым стандартом суррогатного результата МРТ для испытаний SPMS. 2 Нацеливание на определенные патофизиологические процессы является рациональной стратегией лечения ВПРС.

    Липоевая кислота (LA) — это эндогенно продуцируемый антиоксидант с множеством биологических функций, включая улавливание свободных радикалов, хелатирование ионов металлов, регенерацию внутриклеточного глутатиона и восстановление макромолекул при окислительном повреждении. 3 В митохондриях окислительно-восстановительная пара LA / дигидролипоевая кислота является ключевым кофактором пируватдегидрогеназного комплекса окислительного дыхания и способствует синтезу нуклеиновых кислот. 4 LA модулирует сигнальный путь PKB / Akt, важный для целостности эндотелия сосудов, влияет на фактор транскрипции Nrf2 и действует как миметик инсулина. 5,6

    Наш центр и другие показали, что LA снижает инвалидность при экспериментальном аутоиммунном энцефаломиелите (EAE), уменьшает миграцию воспалительных клеток в спинной мозг и зрительные нервы и ингибирует активацию макрофагов / микроглии. 7,8 Пероральный прием LA пациентами с РС приводит к уровням в крови, сравнимым с таковыми при EAE. 9 В клинических испытаниях LA хорошо переносится; частыми побочными реакциями были непереносимость желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), головная боль, зловонная моча и сыпь. 10,11 Здесь мы сообщаем о результатах 2-летнего рандомизированного контролируемого исследования, чтобы определить, снижает ли ЛА частоту атрофии всего мозга, замедляет ли клиническое ухудшение и является ли он безопасным при ВПРС.

    МЕТОДЫ

    Дизайн исследования.

    Это проспективное, одноцентровое, двухлетнее, двойное слепое, рандомизированное, плацебо-контролируемое исследование фазы II перорального рацемического LA в дозе 1200 мг в день для ответа на следующий вопрос первичного исследования с уровнем доказательности I класса: будет ли LA снижает частоту атрофии всего мозга при SPMS? Вторичные вопросы исследования заключались в том, чтобы определить, снизит ли ЛА частоту атрофии сегментированного головного мозга, спинного мозга и субструктур сетчатки, уменьшит ли ухудшение трудоспособности и качества жизни и будет ли безопасным при ВПРС.Набор проводился в период с мая 2011 года по октябрь 2013 года, последний визит был в августе 2015 года. Исследование проводилось в Портлендской системе здравоохранения по делам ветеранов (VAPORHCS), Портленд, штат Орегон, с некоторыми процедурами в Орегонском университете здоровья и науки (OHSU), Портленд, штат Орегон.

    Участники.

    Критериями включения были возраст 40–70 лет, предыдущий RRMS (критерии Макдональда 2005 г.) и текущее SPMS, определяемое прогрессированием инвалидности с рассеянным склерозом при отсутствии клинического рецидива в течение предшествующих 5 лет, как определено главным исследователем (PI) на основании анамнеза. и обзор диаграммы. 12 Прогресс был определен как достаточный для изменения функциональной системы по расширенной шкале статуса инвалидности (EDSS) или достижения значимого функционального изменения (например, прекращение работы из-за когнитивного снижения). 13 Участникам было разрешено начинать, останавливать или продолжать глатирамера ацетат или β-интерферон во время исследования. Критериями исключения были использование натализумаба, иммунодепрессантов, химиотерапии или запланированного внутривенного лечения кортикостероидами в течение 1 года после включения в исследование, лечение кортикостероидами при рецидиве в течение 60 дней после включения в исследование, ЛА в течение 30 дней после включения в исследование, ограничения МРТ, самооценка глазных заболеваний, которые могли сбивать с толку. интерпретация оптической когерентной томографии (ОКТ), беременность или кормление грудью, значительное активное сопутствующее заболевание, неконтролируемый или инсулинозависимый диабет, а также отсутствие свободного владения английским языком.Из-за медленного набора в течение первых 8 месяцев ограничение EDSS в 6.0 было отменено.

    Утверждение стандартных протоколов, регистрация и согласие пациентов.

    Исследование было одобрено экспертными советами VAPORHCS и OHSU. Письменное согласие было получено от всех участников. Исследование было зарегистрировано на сайте ClinicalTrials.gov (NCT01188811) и проводилось в соответствии с рекомендациями CONSORT 2010 года. 14

    Изучите роли персонала.

    PI провела скрининговые визиты и начальные исследования EDSS для рандомизации, оценила нежелательные явления (НЯ) и выступила в качестве монитора исследования.Ослепленные неврологи и опытный практикующий невролог выступали в качестве экзаменаторов EDSS. Ослепленные координаторы исследования собирали данные о мобильности, анкеты и поддерживали базы данных.

    Исследуемый препарат.

    ИП (№ 110132) получило указание на новое исследуемое лекарство. Компания Pure Encapsulations (Садбери, Массачусетс) предоставила желатиновые капсулы, содержащие 600 мг рацемического LA или плацебо. Капсулы плацебо содержали авицел (кристаллы микроцеллюлозы) и 4,3 мг кверцетина (биофлавоноид), что придавало плацебо желтый цвет, похожий на LA.Срок годности исследуемого препарата был продлен один раз во время исследования Pure Encapsulations после повторного тестирования капсул с образцами, определившего сохраняющуюся стабильность.

    График исследования.

    Визиты для скрининга и базовые визиты были разделены на ≤30 дней. Последующие посещения на 3, 6, 12, 18 и 24 месяцах произошли ± 2 недели. Месяц был определен как 4 недели для целей планирования. МРТ и ОКТ проводились на исходном уровне, 12 и 24 месяцев. Данные о клинических исходах собирались на исходном уровне и каждые 6 месяцев. Лабораторные измерения безопасности выполнялись при каждом посещении.Между посещениями и после завершения исследования происходили телефонные звонки для выявления НЯ.

    Результаты.

    Первичным результатом была разница в годовом процентном изменении объема головного мозга (PCBV) на МРТ по оценке структурного изображения с использованием нормализации атрофии (SIENA). Вторичные результаты включали частоту атрофии сегментированных структур головного и спинного мозга и сетчатки, изменения в инвалидности, качество жизни и безопасность.

    Протокол получения МРТ.

    Детали получения и анализа МРТ показаны в приложении e-1 на сайте Neurology.org / nn. Следующие последовательности были получены с использованием Philips Achieva 3.0T серии X с системами градиента Quasar Dual: (1) 3D-градиентное эхо-сигнал для быстрого получения градиентного сигнала с высоким разрешением (3D MP-RAGE) с 1 мм 3 вокселей для высоких структурная (T1-взвешенная) информация разрешения. Верхний шейный отдел спинного мозга был намеренно включен в серию посредством позиционирования; (2) серия 3D-инверсионного восстановления с ослабленным флюидом (3D FLAIR) с вокселями 1 мм 3 ; (3) обычные 3 мм (0.3 промежуток) аксиальная двумерная плотность протонов / Т2-взвешенные последовательности с разрешением в плоскости 1 мм 2 ; и (4) 3-миллиметровая сагиттальная 2D-плотность протонов / Т2-взвешенные последовательности спинного мозга. Внутрисосудистый контраст не применялся.

    МРТ анализы.

    МРТ были рассмотрены нейрорадиологом на предмет неожиданных результатов. Один обученный аналитик МРТ выполнял подсчет повреждений, волюметрию и анализ толщины коры. PI провела анализ толщины поперечного сечения спинного мозга и занятости очагов поражения.Обоими руководил нейрорадиолог. Объемы и карты церебральных Т2-гиперинтенсивных поражений были получены с использованием Lesion TOpology-preserving Anatomical Segmentation (Lesion-TOADS). 15 инструментов FSL использовались для создания изображений MP-RAGE с заполненными очагами поражения. SIENAX использовался для определения поперечных объемов всего мозга, белого и серого вещества. 16 Атрофия всего мозга определялась с помощью SIENA из пакета FSL. 16 Объемы подкоркового глубокого серого вещества были измерены с помощью FIRST. 16 Толщина коры, объемная сегментация коры и их анализ были выполнены с помощью FreeSurfer (surfer.nmr.mgh.harvard.edu/) и его продольного потока обработки. 17 Площадь поперечного сечения спинного мозга регистрировалась в точке С1. Для описательных целей была проведена внутренняя оценка относительного процента спинного мозга от большого затылочного отверстия до нижнего края C7, занятого очагами рассеянного склероза. МРТ оценивали по качеству (хорошее, удовлетворительное, плохое и непригодное для использования). Плохие и непригодные для использования сканы были исключены из анализа.

    окт.

    Участники прошли ОКТ спектральной области (Cirrus HD-OCT; Carl Zeiss Meditec, Inc., Дублин, Калифорния) в каждом глазу после фармакологического расширения (1% тропикамида и 0,5% гидрохлорида пропаракаина). Перипапиллярное сканирование и сканирование желтого пятна были получены с использованием протоколов Optic Disc Cube 200 × 200 и Macular Cube 512 × 128 соответственно. ОКТ проверял опытный нейроофтальмолог. Исключенные сканы имели противоречивые результаты, артефакты, рассогласование или мощность сигнала менее 7.

    Клинические меры.

    Инвалидность была зафиксирована EDSS. Один и тот же экзаменатор EDSS использовался для данного участника на протяжении всего исследования, насколько это было возможно. Мероприятиями по мобильности для амбулаторных участников были: ходьба на время 25 футов (T25FW), опросник по шкале ходьбы при рассеянном склерозе (MSWS-12) и опросник по уверенности в балансе по видам деятельности (ABC). 18, -, 20 Тест символьных цифр (SDMT) проверял когнитивные способности. 21 Краткое описание состояния здоровья RAND, состоящее из 36 пунктов, для оценки качества жизни. 22

    Контроль безопасности.

    НЯ были классифицированы с использованием критериев общей терминологии для нежелательных явлений версии 4.0 (CTCAE v4.0). Незапланированные посещения имели место при рецидивах, НЯ и посещениях для раннего прекращения исследования. При каждом посещении проверялись лабораторные анализы по мониторингу безопасности (общий анализ крови и панели почек и печени). Колумбийская шкала оценки степени тяжести суицида (C-SSRS) применялась при каждом посещении. Совет по безопасности и мониторингу данных, состоящий из 3 человек, собирается ежегодно.

    Размер выборки, рандомизация и слепой анализ.

    Исследование было проведено для сравнения основного результата, PCBV, по оценке Altmann et al. 23 с использованием стандартного отклонения 1,51 для атрофии SIENA, 2-летней продолжительности исследования с ежегодными МРТ и величины эффекта 60%. Размер выборки 23 на руку был необходим для получения 80% мощности и значимости p <0,05. Прогнозируемый набор был увеличен с учетом отсева. Неслепой исследовательский фармацевт назначил участников на LA или плацебо в соотношении 1: 1 после рандомизации с перестановкой блоков, основанной на EDSS ≤4.5 или> 4.5. 13 Весь остальной исследовательский персонал не знал назначения лечения. МРТ были помечены дополнительными случайно сгенерированными числами во время анализа, чтобы еще больше снизить риск систематической ошибки. Статистический анализ проводился слепым статистиком по первичным, вторичным критериям и критериям безопасности.

    Статистические методы.

    В анализе «намерение лечиться» (ITT) использовались линейные смешанные модели для оценки влияния LA на среднегодовое значение PCBV. Смешанные модели использовались для корректировки серийной корреляции внутри участников, для учета повторных измерений продольного дизайна и для включения всех участников исследования.Модели были скорректированы с учетом возраста, пола и продолжительности рассеянного склероза участников с помощью стандартной диагностики модели для выявления чрезмерно влиятельных точек воздействия. Множественные сравнения были учтены с использованием поправки Холма-Сидака в пределах областей результатов исследования. Точки выбросов были идентифицированы с помощью стандартных диагностических методов с использованием комбинаций рычагов влияния точек данных, индивидуальных остатков и расстояния Кука для выявления чрезмерно влиятельных наблюдений и исключения их из базового анализа и анализа двухлетних изменений.Данные участников, принимавших уменьшенную дозу LA (n = 2), не обрабатывались по-разному при анализе результатов, поскольку их ограниченное количество делало оценку подгруппы трудноразрешимой. Результаты смешанной модели представлены как скорости изменения с дисперсией, представленной стандартными ошибками оценок коэффициентов (SEE). Был проведен апостериорный анализ оценки первичного исхода, добавив в модель базовый объем всего мозга и исходный объем Т2-поражения в качестве ковариант. Все анализы были выполнены с использованием R 3.3.1 с дополнительной утилитой из пакета lme4. 24,25

    РЕЗУЛЬТАТЫ

    Из 54 согласившихся и рандомизированных 51 участник (27 LA и 24 плацебо) приняли по крайней мере 1 дозу исследуемого препарата и были включены в анализ ITT (рисунок 1). 46 участников завершили исследование (22 LA и 24 плацебо). 5 выбывших из когорты LA были вызваны клаустрофобией во время МРТ, продолжительной тошнотой и рвотой, которые исчезли после прекращения LA, и значительным сопутствующим заболеванием (рак простаты, протеинурия и ухудшение функции почек).Поскольку выбывший с клаустрофобией не завершил исходную МРТ, размер ITT-выборки LA когорты для PCBV составил 26 (рис. 1).

    Рис. 1 Блок-схема CONSORT 2010

    Исходные демографические данные представлены в таблице 1. Когорты LA и контрольные группы были в целом сопоставимы по возрасту, полу, продолжительности РС, образованию и инвалидности. Не было значительных различий между группами лечения (все p > 0,05). В таблице 2 представлены исходные значения основных показателей результатов исследования по группам исследования.Когорта LA имела значительно больший исходный объем всего мозга ( p = 0,004) и общий объем глубокого серого вещества ( p = 0,042). Контрольная группа имела больший исходный нормализованный объем Т2-поражений.

    Таблица 1

    Исходные демографические и клинические характеристики участников исследования в зависимости от лечения (n = 51)

    Таблица 2

    Различия на исходном уровне между показателями результатов исследования (среднее, стандартное отклонение)

    Соответствие исследуемому препарату составило 87% по количеству таблеток. Два участника принимали вдвое меньшую дозу LA в соответствии с протоколом для большей части исследования, по одному от гастрита и повышенного уровня щелочной фосфатазы.

    Частота атрофии головного мозга и вторичные результаты визуализации.

    Через 2 года участники, принимавшие LA, имели значительно меньшее годовое значение PCBV (-0,21% [SEE 0,14]), чем контрольная группа (-0,65% [SEE 0,10], p = 0,002), при этом наблюдалась величина положительного эффекта лечения LA. повышение скорости атрофии всего мозга на 0,44 ± 0,29% (95% доверительный интервал [ДИ] 0,157–0,727). Это изменение соответствует 68% снижению скорости атрофии головного мозга в группе LA по сравнению с плацебо (рисунок 2A, таблица 3).В апостериорном анализе исходный объем всего мозга не был связан с какими-либо другими контролирующими переменными (возраст, пол и продолжительность заболевания), а также не повлиял на различия в PCBV между когортами исследования. Аналогичным образом, изменение объема поражения Т2 за период исследования не было связано ни с одной из корректирующих переменных, включая исходный объем поражения Т2. Показаны отдельные двухлетние изменения PCBV для LA (-0,45% [SEE 0,71]) по сравнению с контролем (-1,31% [SEE 1,10], p = 0,001) у завершивших исследование (рис. 2B).Сегментация мозга и ОКТ не выявили значительных различий в среднегодовых темпах изменений между группами исследования; увеличение объема Т2-поражения в когорте LA было почти, но не значительно отличалось от контроля (414,6 [SEE 201,2] против 33,1 [SEE 134,7], p = 0,058, таблица 3).

    Рисунок 2 Различия в атрофии головного мозга через 2 года между LA и контрольной когортами

    Годовое процентное изменение объема мозга (PCBV) между LA и плацебо-когортами с использованием анализа намерения лечить 51 участника с вторично прогрессирующим РС (A).Двухлетний PCBV от завершивших исследование показан и демонстрирует значительно меньшее PCBV в когорте LA (n = 22, −0,45% [SEE 0,71]), чем в контроле (n = 24, −1,31% [SEE 1.10], p = 0,001, В). LA = липоевая кислота; SEE = стандартные ошибки оценки коэффициента.

    Клинические исходы.

    Среди клинических исходов когорта LA продемонстрировала улучшение T25FW, которое почти, но не значительно отличалось от контроля (-0,535 [SEE 0,358] против 0,137 [SEE 0,247], 95% ДИ -1.37 до 0,03, p = 0,060).

    АЕ.

    AE представлены в таблице e-1. Количество НЯ было одинаковым между ЛА и контрольной группой (80 и 68, соответственно, p = 0,87), с 6 серьезными НЯ (SAE) в каждом. Больше нарушений со стороны желудочно-кишечного тракта (14 [SD 17%] против 2 [SD 3%], p = 0,007) и меньшее количество падений (12 [SD 15%] против 26 [SD 38%], p = 0,03). когорта Лос-Анджелеса. У одного участника ЛА развилась не вызывающая беспокойства везикулярная сыпь, аналогичная ранее описанной, которая исчезла в течение 6 недель после завершения исследования. 11 Один рецидив произошел в каждой исследуемой когорте, ни один из которых не повлиял на последующее обследование EDSS. Не было нового суицидального поведения по C-SSRS, и не было различий между когортами по новым лабораторным отклонениям; однако только те, кто принимал LA, требовали снижения дозы согласно протоколу (n = 2). Мысль о СНЯ, непосредственно связанных с ЛП, была рвотой и обезвоживанием, требующими госпитализации, которые исчезли после прекращения ЛП. Заметными НЯ, приведшими к выбыванию, были один пациент с ЛА с исходным повышением креатинина, прогрессирующим до почечной недостаточности, и другой с протеинурией из-за гломерулонефрита.Консультирующий нефролог не подумал, что 2 НЯ были связаны с ЛП. НЯ более подробно рассматриваются в Приложении e-2.

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Это двухлетнее, рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое пилотное исследование продемонстрировало значительное снижение показателя первичного исхода годовой скорости атрофии всего мозга по SIENA у людей с ВПРС, принимающих перорально в дозе 1200 мг в день. ЛА. На годовое сокращение PCBV не повлияли ни запланированные ковариаты возраста, пола и продолжительности заболевания, ни постфактумные добавления базовых объемов головного мозга и Т2-поражений.Было высказано предположение об улучшении времени T25FW, и в когорте LA было меньше падений. В целом ЛА была безопасна, хорошо переносилась, имела высокую комплаентность и не имела неожиданных вредных НЯ или СНЯ, связанных с ЛП.

    Снижение частоты атрофии головного мозга выгодно отличается от масштабного исследования 3 фазы окрелизумаба (n = 731), в котором сообщается о снижении частоты атрофии всего мозга на 17,5% в течение 120 недель. 26 В отличие от настоящего исследования, исследование окрелизумаба включало только пациентов с первичным прогрессирующим РС с большим количеством мужчин (51% против 39%), которые были моложе (45 против 59 лет), имели более короткую продолжительность заболевания (6.5 против 30 лет) и меньшая степень инвалидности (EDSS 4,7 против 5,4). Исследование окрелизумаба ограничивалось включением пациентов с воспалительной ЦСЖ, характеристика, не оцениваемая в этом исследовании. Другие испытания модифицирующей болезнь терапии в популяциях прогрессирующего РС не продемонстрировали достоверных изменений в показателях атрофии головного мозга или не использовали этот показатель результатов. 27, -, 29

    Снижение PCBV было для оценки всего мозга SIENA, надежного метода измерения продольной атрофии на основе регистрации. 30 Сегментация мозга не выявила специфических отделов мозга, ответственных за разную частоту атрофии.Одно из объяснений состоит в том, что расчет размера выборки был основан на SIENA, а не на методах сегментации, методах, которые дают неоднородные результаты и требуют более крупных выборок. 30 Сегментированные объемы могут быть более подвержены физиологическим факторам, включая состояние гидратации и расположение, чем измерения всего мозга. 31 В качестве альтернативы снижение PCBV может происходить из-за эффекта, общего для всех тканей мозга. Повторение исследования на более крупной выборке прояснит природу эффектов атрофии ЛА.

    Предположение о большем увеличении объема Т2-поражения в когорте ЛП имеет неопределенное значение. Увеличение может быть реальным и, таким образом, представлять потенциальные вредные эффекты LA, может представлять физиологические изменения, не связанные с MS, может быть результатом проблем с качеством постобработки MR или может не отличаться от плацебо. 15 Требуется дальнейшая оценка.

    В целом, LA был безопасен и хорошо переносился. Лабораторные отклонения ограничивались бессимптомным повышением щелочной фосфатазы, которое улучшалось после прекращения LA.Хотя не было никаких неожиданных НЯ или СНЯ, явно связанных с ЛП, случаи почечной недостаточности и гломерулонефрита вызывают беспокойство. Предыдущие исследования с LA не сообщили о нарушении функции почек. 9, -, 11 Тем не менее, более тщательный мониторинг функции почек является целесообразным для будущих исследований ЛА и предполагает осторожность в рекомендации этой дозы ЛА перед дальнейшими оценками.

    Потенциальным искажающим фактором исследования, о котором авторы не знали при планировании исследования, было присутствие кверцетина (8.6 мг в день) в качестве плацебо. Кверцетин, как и другие биофлавоноиды, биологически активен. Хотя существуют противоречивые сообщения, Van Beek et al. обнаружили, что 10 мг кверцетина перорально в день усиливают воспаление и усугубляют активный и пассивный EAE у мышей. Это повышает вероятность того, что в настоящем исследовании кверцетин мог ухудшить контроль и преувеличить эффекты LA. 32 Расчетная доза для человека, аналогичная исследованию Ван Бика, составляет 2 г, что на порядки больше, чем в капсулах с плацебо. 33 Таким образом, хотя маловероятно, что это повлияет на результаты настоящего исследования, в будущих исследованиях следует избегать применения кверцетина, чтобы исключить эту возможность.

    Другие ограничения исследования связаны, прежде всего, с небольшим размером выборки этого пилотного исследования, что, как уже обсуждалось, приводит к потере возможностей для выявления клинических и вторичных результатов визуализации. В свете этого очень сильное снижение скорости атрофии головного мозга можно рассматривать со скептицизмом, хотя сопоставимая скорость атрофии в контрольной группе с другими необработанными когортами SPMS подтверждает полученные данные. 23,34 Базовые различия в объеме мозга или объеме поражения Т2 существовали между когортами исследования; однако апостериорный анализ не выявил влияния этих различий на результаты исследования. Увеличение размера выборки в будущих исследованиях должно исправить базовые дисбалансы. Наконец, поскольку контрастное вещество не использовалось, исходные и текущие различия в воспалительной активности на МРТ неизвестны.

    Это двухлетнее пилотное исследование 1200 мг ежедневно LA продемонстрировало значительное снижение PCBV у пациентов с SPMS по сравнению с контрольной группой.Небольшой размер выборки не позволил выявить клиническую пользу, хотя высказывались предположения об уменьшении времени ходьбы и значительном уменьшении числа падений. Хотя ЛА в целом безопасен и хорошо переносится, в будущих исследованиях необходимо установить клинические преимущества и изучить механизмы действия ЛА при прогрессирующем РС.

    ВКЛАД АВТОРА

    Ребекка Испания: концепция и дизайн исследования, надзор за исследованием, анализ и интерпретация данных, составление рукописи и полученное финансирование. Кэтрин Пауэрс: сбор данных, анализ МРТ и составление рукописи.Чарльз Мурчисон: статистический анализ и составление рукописи. Элизабет Хериза: сбор данных и обзор рукописи. Kimberly Winges: обзор OCT, анализ данных и интерпретация данных, а также обзор рукописи. Виджайши Ядав, Мишель Камерон и Эдвард Ким: сбор данных. Фэй Хорак: концепция исследования и рецензия на рукопись. Джек Саймон: концепция исследования и дизайн, анализ и интерпретация данных, а также составление рукописи. Деннис Бурдетт: концепция и дизайн исследования, руководство исследованием, анализ и интерпретация данных, а также критический обзор рукописи.

    ФИНАНСИРОВАНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ

    При поддержке Департамента по делам ветеранов (B7493-W, Р. Испания), NIH (UL1TR000128).

    РАСКРЫТИЕ ИНФОРМАЦИИ

    R. Испания получила исследовательскую поддержку от Департамента по делам ветеранов, Орегонского института клинических и трансляционных исследований, Системы здравоохранения Портленда, Орегонского университета здоровья и науки, Национального общества рассеянного склероза, Фонда Конрада Хилтона, Фонда медицинских исследований Орегона, и гонка, чтобы стереть MS. К. Пауэрс, К. Мерчисон, Э. Хериза, К.Winges не сообщают о раскрытии информации. В. Ядав консультировал компании Bayer, Biogen и Teva MS; работал в бюро спикеров Novartis и Biogen; и получил исследовательскую поддержку от Biogen, Департамента по делам ветеранов, Фонда Макдугалла, Национального общества РС, Фонда Race to Erase MS и NIH. М. Кэмерон получил финансирование на поездку от Консорциума центров рассеянного склероза и VA Portland Research; является членом редакционной коллегии журнала Journal of Hand Therapy ; редактор раздела Nature Reviews Neuroscience ; получает гонорары за публикацию от Elsevier; консультировал ReWalk Corporation и Adamas Corporation; получил исследовательскую поддержку от Департамента по делам ветеранов, Службы исследований и разработок в области реабилитации, Национального общества рассеянного склероза и Фонда парализованных ветеранов Америки.Э. Ким входила в научно-консультативный совет Genzyme и Teva и получала исследовательскую поддержку от Национального общества рассеянного склероза. Ф. Хорак входил в состав научного консультативного совета Общества РС и NIH NCMRR; получал финансирование командировок и / или гонорары докладчикам за лекции и образовательные мероприятия, не финансируемые промышленностью; работал помощником редактора в Gait and Posture , Cerebellum и Encyclopedia for Neuroscience ; входил в состав редакционной коллегии журнала Journal of Biomechanics , Frontiers in Neurology и Frontiers in Neuro-Otology ; имеет патенты на устройство для поддержания баланса и координации движений, Инструментальную систему подвижности для объективного измерения баланса и походки; получает гонорары за публикацию от McGraw-Hill; получил исследовательскую поддержку от MRF NCI, NIH, SBIR, MRF, MRF Mentor, STTR, NIA, NCI, NIH / CCHD / NCMRR MJFF, NMSS, Национального института неврологических расстройств и инсульта, наставника NMSS и MRAA армии США; и владеет акциями APDM, Inc.Дж. Саймон входил в состав научно-консультативного совета компании Biogen; получает гонорары за публикацию от Cambridge University Press; и консультировал Biogen, благотворительный фонд Guthy-Jackson. Д. Бурдетт получил финансирование на поездку от Национального общества рассеянного склероза, Консорциума центров рассеянного склероза и Парализованных ветеранов Америки; входит в редколлегию журнала Neurology ; имеет патенты на лечение рассеянного склероза циклическими пептидными производными циклоспорина и тромиметическими препаратами для стимуляции ремиелинизации при рассеянном склерозе; консультировали Magellan Health, Best Doctors, Inc.; и получил исследовательскую поддержку от Национального общества рассеянного склероза. Посетите Neurology.org/nn для получения полных форм раскрытия информации.

    ПОДТВЕРЖДЕНИЕ

    Pure Encapsulations, Садбери, Массачусетс, предоставили липоевую кислоту и плацебо. Авторы благодарят участников исследования, доктора Элизабет Херизу за руководство исследованием, а также членов совета по безопасности и мониторингу данных за ежегодные обзоры данных.

    Сноски

    • Информация о финансировании и раскрытие информации приведены в конце статьи.Посетите Neurology.org/nn для получения полных форм раскрытия информации. Плата за обработку статьи была оплачена авторами.

    • Дополнительные данные на Neurology.org/nn

    • Получено 7 марта 2017 г.
    • Принято в окончательной форме 15 мая 2017 г.
    • Авторские права © 2017 Автор (ы). Опубликовано Wolters Kluwer Health, Inc. от имени Американской академии неврологии.

    Сульфорафан и α-липоевая кислота усиливают экспрессию π-класса глутатион-S-трансферазы посредством активации c-Jun и Nrf2 | Журнал питания

    Аннотация

    Антиканцерогенное действие содержащихся в пище сероорганических соединений частично объясняется их модуляцией активности и экспрессии ферментов детоксикации фазы II.Наши предыдущие исследования показали, что аллилсульфиды чеснока усиливают экспрессию π-класса глутатион- S -трансферазы (GSTP) через активаторный белок-1 путь. Здесь мы исследовали модулирующий эффект сульфорафана (SFN) и α-липоевой кислоты (LA) или дигидролипоевой кислоты (DHLA) на экспрессию GSTP в клетках печени крыс клона 9. Клетки обрабатывали LA или DHLA (50–600 мк моль / л) или SFN (0,2–5 мк моль / л) в течение 24 ч. Иммуноблоттинг и ПЦР в реальном времени показали, что SFN, LA и DHLA дозозависимо индуцируют экспрессию белка и мРНК GSTP.По сравнению с индукцией сероорганическим соединением чеснока диаллилтрисульфидом (DATS) эффективность была в следующем порядке: SFN> DATS> LA = DHLA. Увеличение активности фермента GSTP в клетках, обработанных 5 μ моль / л SFN, 50 μ моль / л DATS и 600 μ моль / л LA и DHLA, составило 172, 75, 122 и 117%. соответственно ( P <0,05). Репортерный анализ показал, что энхансер I GSTP (GPEI) необходим для индукции GSTP сероорганическими соединениями.Анализ сдвига в геле с электромобильностью показал, что связывание ДНК GPEI с ядерными белками достигает максимума через 0,5–1 ч после обработки SFN, LA и DHLA. Анализ супер-сдвига показал, что факторы транскрипции c-jun и ядерный фактор, связанный с эритроидом-2, фактор 2 (Nrf2) были связаны с GPEI. Эти результаты предполагают, что SFN и LA в окисленной или восстановленной форме активируют транскрипцию гена GSTP путем активации связывания c-jun и Nrf2 с энхансерным элементом GPEI.

    Введение

    Эпидемиологические исследования показали, что люди, которые потребляют большое количество овощей и фруктов в своем рационе, могут снизить риск рака (1,2).Частично это можно объяснить высоким содержанием многочисленных фитохимических веществ в овощах и фруктах, включая полифенольные соединения, каротиноиды и сероорганические соединения (2–5). Накопленные данные подтверждают, что аллилсульфиды чеснока, полученные из аллиина, и изотиоцианаты семейства крестоцветных защищают животных от различных химических канцерогенов (1,6). Эту химиопрофилактику можно частично объяснить способностью этих фитохимических веществ модулировать активность и экспрессию генов детоксикационных ферментов фазы II (7–9).

    Глутатион S -трансфераза (GST) 5 — это фермент фазы II, который катализирует конъюгацию глутатиона с различными электрофильными ксенобиотиками и облегчает их выведение. У млекопитающих 8 изоферментов GST, включая A (α), M ( μ ), O (ω), P (π), S (σ), T (θ), Z (ζ) и K (κ). , были идентифицированы (10). В последнее время возрос интерес к физиологическим свойствам π-класса GST (GSTP) не только из-за его функции в детоксикации лекарств, но и из-за его возможной роли в трансформации клеток и канцерогенезе (11,12).Активность GSTP была использована для оценки эффективности химиопрофилактических агентов при раке, вызванном бензо [ a ] пиреном (13). Важность GSTP в профилактике рака дополнительно подтверждается тем фактом, что рак кожи, вызванный 7,12-диметилбензантраценом, значительно повышен у GSTP-нулевых мышей (14). Два усиливающих элемента были идентифицированы в 5′-восходящей области гена GSTP и были названы GSTP-энхансером I (GPEI, –2,5 т.п.н.) и II (GPEII, –2,2 т.п.н.) (15). GPEI содержит 2 форбол-12- O -тетрадеканоат-13-ацетат-подобных элементов (TRE) -подобных элементов, которые считаются необходимыми для базальной и индуцибельной экспрессии GSTP (16).Усилители экспрессии GSTP регулируются множеством факторов, включая активаторный белок-1 (AP-1), который, как известно, является гетеродимером или гомодимером, состоящим из продуктов c-Jun и c-fos (17). Поскольку TRE-подобные элементы в GPEI имеют общие последовательности, сходные с последовательностями элемента антиоксидантного ответа (ARE), фактор 2, связанный с ядерным фактором эритроид-2 (Nrf2), также рассматривается как возможный транскрипционный фактор, который связывается с GPEI (18).

    Сульфорафан (SFN), изотиоцианатное соединение, богатое овощами семейства крестоцветных, продемонстрировало свою высокую эффективность в обеспечении защиты от химически индуцированного рака на животных моделях (6,9).Эта цитозащита с помощью SFN может быть объяснена его активацией апоптоза, а также его эффективной индукцией экспрессии ферментов детоксикации фазы II и антиоксидантных ферментов, включая α-класс GST (GSTA), μ класс GST (GSTM), NAD ( P) H-зависимые хинон оксидоредуктазы 1 (NQO1) и γ-глутамилцистеинсинтаза (9,19,20). Недавно было показано, что повышение экспрессии генов цитопротекторных генов с помощью SFN зависит от Nrf2-ARE (21,22).

    α-Липоевая кислота (LA) — тиоловый антиоксидант, содержащийся в овощах, включая брокколи, шпинат и помидоры (23).LA и его восстановленная форма, дигидролипоевая кислота (DHLA), не только действуют как мощные поглотители свободных радикалов и хелаторы металлов (24), но также участвуют в переработке других клеточных антиоксидантов, включая витамин C, витамин E и глутатион (25). Недавно сообщалось, что экспрессия нескольких ферментов фазы II модулируется LA и DHLA. В клетках лейкемии человека HL-60 и клетках нейробластомы SH-SY5Y LA эффективна в повышении регуляции транскрипции гена NQO1 (26,27). Индукция экспрессии GSTA2 с помощью ЛА, вероятно, связана с фосфатидилинозитол-3-киназным путем (8).Что касается GSTP, однако, неясно, индуцируют ли LA и DHLA экспрессию этого фермента детоксикации.

    Недавно мы сообщили, что чесночное масло и два его основных серорганических компонента, диаллилдисульфид и диаллилтрисульфид (DATS), могут эффективно регулировать экспрессию мРНК GSTP и белка. Более того, GPEI необходим для индукции этого фермента фазы II (28-30). В дополнение к аллилсульфидам чеснока, мы также были заинтересованы в изучении того, эффективны ли сероорганические соединения, не полученные из чеснока, в повышающей регуляции экспрессии GSTP и возможных вовлеченных факторов транскрипции.Поэтому в настоящем исследовании мы изучили модулирующий эффект SFN, LA и DHLA на экспрессию GSTP в клетках клона 9 печени крысы. Кроме того, мы сравнили относительную эффективность индукции на GSTP DATS, LA, DHLA и SFN.

    Материалы и методы

    Материалы.

    Все остальные химические вещества были приобретены у Sigma-Aldrich, если не указано иное. SFN и DATS были получены от LKT Laboratories. Среда RPMI-1640 и раствор пенициллин-стрептомицин были получены из лаборатории Gibco.Ингибитор РНКазы, олиго dT и ОТ вируса мышиного лейкоза Молони были приобретены у Promega. Праймер для GSTP и глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH) был получен от Applied Biosystems. Фетальная бычья сыворотка была приобретена у Hyclone. Тризол и липофектамин заказывались в Invitrogen.

    Культура клеток.

    Клетки

    Clone 9, которые были получены из печени нормальной крысы, были получены из Центра сбора и исследования биоресурсов. Их выращивали в среде RPMI-1640 с добавлением 10 ммоль / л HEPES, 100 kU / л пенициллина, 100 мг / л стрептомицина и 10% фетальной бычьей сыворотки при 37 ° C в увлажненной атмосфере с 5% CO 2 и 95% воздуха.Для всех исследований использовали клетки между пассажами 4 и 10. Клетки высевали на 35-миллиметровые пластиковые чашки для культивирования тканей (Falcon) при плотности 2,5 × 10 5 клеток / чашку и оставляли для роста в течение 24 часов. Затем добавляли свежую культуральную среду, содержащую различные концентрации DATS, LA, DHLA или SFN, и клетки инкубировали в течение указанного времени. Клетки, обработанные только 0,1% диметилсульфоксидом (ДМСО), использовали в качестве контроля.

    SDS-PAGE и вестерн-блоттинг.

    Клетки дважды промывали холодным PBS и затем собирали в 300 мкл л 20 ммоль / л калий-фосфатного буфера (pH 7,0). Супернатанты центрифугировали при 10,000 × g в течение 30 мин при 4 ° C. Концентрации белка определяли с помощью набора реагентов для анализа белка Coomassie Plus (Pierce Chemical). Четыре микрограмма клеточных белков из каждого образца наносили на 10% SDS-полиакриламидные гели и электрофоретически переносили на поливинилиденфторидные мембраны (Millipore).Мембраны блокировали при 4 ° C в течение ночи с помощью 50 г / л обезжиренного сухого молочного раствора, а затем инкубировали с первичными антителами против GSTP (Transduction Laboratories), GSTA, GSTM (все от Oxford Biomedical Research), NQO1, c-Jun, phospho. -c-Jun, Nrf2 (все от Santa Cruz Biotechnology) или β-актин в течение 70 минут при комнатной температуре, а затем инкубировали с козьим антикроличьим IgG, конъюгированным с пероксидазой хрена, козьим антимышиным IgG (все от Perkinelmer Life Sciences ) или вторичное антитело кролика против козьего IgG (R&D Systems).Полосы визуализировали с использованием набора для усиленной хемилюминесценции (Perkin-Elmer Life Science).

    ПЦР в реальном времени.

    Общая РНК была экстрагирована с использованием реагента Trizol. Всего 0,8 мкг г РНК использовали для синтеза первой кДНК. RT проводили в программируемом термоциклере и проводили в 20 мкл л, содержащих 25 ммоль / л Трис-HCl (pH 8,3), 50 ммоль / л (NH 4 ) 2 SO 4 , 0,3 % β-меркаптоэтанола, 0.1 г / л бычьего сывороточного альбумина, 5 ммоль / л MgCl 2 , 1 ммоль / л каждого дезоксинуклеотидтрифосфата, 2,5 ед. Ингибитора РНКазы и 2,5 ммоль / л олиго-dT и RT вируса мышиного лейкоза Молони. Реакционную смесь инкубировали в течение 1 цикла при 42 ° C 15 мин, 99 ° C 5 мин и 4 ° C 10 мин. ПЦР в реальном времени проводили в детекторе последовательностей ABI Prism 7000 (Applied Biosystems), добавляя 5 мкл л кДНК, 10 мкл л мастер-смеси, 5 мкл мкл ddH 2 O и 1 мкл. л GSTP (Rn02770492_gh) и праймера GAPDH (Mm99999915_gl) в каждую микролунку.Реакцию проводили по следующей программе: 1 цикл при 50 ° C в течение 2 минут и 95 ° C в течение 10 минут, затем 40 циклов при 95 ° C в течение 15 секунд и 60 ° C в течение 1 минуты. Сравнительный метод Ct (порогового цикла) был использован для определения относительного количества мРНК GSTP (31). Метод ΔCt использовался для количественной оценки амплифицированных генных мишеней в соответствии с протоколом производителя (Applied Biosystems). Вкратце, количество циклов, необходимых для достижения порогового уровня логарифмической флуоресценции (значение Ct), было нормализовано к значению Ct гена GAPDH в каждом образце.Относительное значение экспрессии для гена GSTP было рассчитано как 2 — ΔΔCt , где ΔΔCt представляет собой разность Ct между геном GSTP и геном GAPDH (ΔCt = Ct , ген GSTP — Ct , ген GAPDH ; ΔΔCt = ΔCt GSTP. ген — калибратор ΔCt ).

    Анализ активности ферментов.

    Активность

    GST измеряли с использованием этакриновой кислоты в качестве субстрата из-за ее лучшей селективности по отношению к изоферменту π-класса (32). Вкратце, реакционная смесь в конечном объеме 1 мл содержала 100 ммоль / л калий-фосфатного буфера (pH 6.5), 0,5 ммоль / л глутатиона, 0,2 ммоль / л этакриновой кислоты и соответствующее количество общих белков. Образующийся конъюгат этакринат-глутатион измеряли при 270 нм. Активность GST измеряли с использованием 1-хлор-2,4-динитробензола, тогда как активность NQO-1 определяли с использованием 2,6-дихлориндофенола в качестве субстрата (33).

    Экспрессионные и репортерные конструкции.

    Репортер pTA-GSTP Luc с промоторной областью гена GSTP был сконструирован, как описано ранее (28).Фрагмент гена GSTP размером 2,7 т.п.н. вставляли в сайт Mlu I и Nhe I вектора pTA-SEAP / Luc (Clontech). В дополнение к полноразмерной конструкции (Luc-2713) были созданы 2 конструкции с делециями от -2713 до -2605 п.н. (Luc-2604) и от -2713 до -2376 п.н. (Luc-2375). Репортер с фрагментом GPEI был сконструирован путем лигирования сегмента от -2713 до -2605 п.н. в вектор pTA-SEAP / Luc и был обозначен как Luc-GPE.

    Переходная трансфекция и анализ активности люциферазы.

    Клетки

    Clone 9 высевали с плотностью 2,5 × 10 5 клеток на 35-миллиметровые пластиковые чашки для тканевых культур и чашки инкубировали до достижения 70% слияния. Клетки временно трансфицировали в течение 5 часов 0,1 мкл г векторов pTA-GSTP Luc с помощью липофектаминового реагента, а затем подвергали воздействию каждого из сероорганических соединений в течение дополнительных 15 часов. Затем клетки дважды промывали PBS и лизировали в 100 мкл л лизирующего буфера. Люциферазную активность измеряли с использованием реагента для анализа люциферазы (Clontech) в соответствии с инструкциями производителя.Активность люциферазы каждого образца корректировали на основе активности β-галактозидазы, которую измеряли при 420 нм с O -нитрофенил β-D-галактопиранозидом в качестве субстрата. Значение для клеток, обработанных только носителем ДМСО, было расценено как 1.

    Анализ сдвига в геле электромобильности.

    Анализ сдвига электрофоретической подвижности (EMSA) был проведен в соответствии с нашим предыдущим исследованием (29). Клетки дважды промывали холодным PBS, а затем соскребали с чашек PBS.Гомогенаты клеток центрифугировали при 2000 × g в течение 5 мин. Осадок клеток давали набухнуть на льду в течение 15 мин после добавления 200 мкл л гипотонического буфера, содержащего 10 ммоль / л HEPES, 10 ммоль / л KCl, 1 ммоль / л MgCl 2 , 1 ммоль / л ЭДТА, 0,5 ммоль / л дитиотреитола (DTT), 0,5% Nonidet P-40, 4 мг / л лейпептина, 20 мг / л апротинина и 0,2 ммоль / л фенилметилсульфонилфторида. После центрифугирования при 6000 × g в течение 15 мин осадки, содержащие сырые ядра, ресуспендировали в 50 мкл л гипертонического буфера, содержащего 10 ммоль / л HEPES, 400 ммоль / л KCl, 1 ммоль / л MgCl 2 , 1 ммоль / л ЭДТА, 0.5 ммоль / л DTT, 10% глицерин, 4 мг / л лейпептина, 20 мг / л апротинина и 0,2 ммоль / л фенилметилсульфонилфторида и инкубировали еще 30 мин на льду. Затем ядерные экстракты получали центрифугированием при 10,000 × g в течение 15 мин и замораживали при -80 ° C до проведения EMSA.

    Набор LightShift Chemiluminescent EMSA (Pierce Chemical) и синтетический биотин-меченный двухцепочечный консенсусный олигонуклеотид GPEI (прямой: 5′-AGTAGTCAGTCACTATGATTCAGCAAC-3 ‘; обратный: 5’-GTTGCTGAATCATAGTGACT’GACT) были использованы для измерения эффекта ACT-GACT). сероорганические соединения на активность связывания ядерного белка GPEI с ДНК.Немеченый двухцепочечный GPEI (200 нг) и мутантный двухцепочечный олигонуклеотид также использовали для подтверждения специфического связывания. Два микрограмма ядерного белка, поли (dI-dC) и меченного биотином двухцепочечного олигонуклеотида GPEI смешивали со связывающим буфером до конечного объема 20 мкл л и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин. Комплекс ядерный белок-ДНК разделяли электрофорезом в 6% геле трисборной кислоты-ЭДТА-полиакриламид и затем электропереносили на нейлоновую мембрану Hybond-N + (GE Healthcare).Мембрану обрабатывали стрептавидин-пероксидазой хрена, и полосы ядерный белок-ДНК проявляли с использованием набора для усиленной хемилюминесценции. В анализе супер-сдвига ядерный белок инкубировали с 1 мкл г моноклонального антитела против c-Jun в течение 30 мин после реакций связывания и подвергали электрофорезу, как описано выше.

    Иммунопреципитация.

    Всего 15 мкМ г ядерных белков сначала инкубировали с 1 мкг мкг антитела против Nrf2 в течение ночи при 4 ° C.Клетки смешивали с шариками протеин A-сефароза 0,1 г / л в течение 1 ч при 4 ° C. Иммунопреципитированные комплексы осаждали центрифугированием при 16000 × g в течение 2 мин при 4 ° C. Осадок 5 раз промывали 1 мл IP-буфера (40 ммоль / л Трис-HCl, pH 7,4, 1% Nonidet P-40, 150 ммоль / л NaCl, 5 ммоль / л EGTA, 1 ммоль / л DTT, 1 ммоль. / Л фенилметилсульфонилфторида, 1 мг / л апротинина, 1 мг / л лейпептина, 20 ммоль / л фторида натрия, 1 ммоль / л ортованадата натрия) и затем подвергали электрофорезу с последующим вестерн-блоттингом.

    Статистический анализ.

    Статистический анализ выполнялся с помощью имеющегося в продаже программного обеспечения (SAS Institute). Данные были проанализированы с использованием однофакторного дисперсионного анализа, а значительная разница между лечебными средствами оценивалась с помощью теста Тьюки. Различные конструкции с делециями в одной обработке анализировали с помощью отдельного дисперсионного анализа. Значение P <0,05 считалось значимым.

    Результаты

    Экспрессия белка GSTP.

    В данном исследовании клетки Clone 9 инкубировали с 50 мкл моль / л DATS, 50-600 мк моль / л LA или DHLA или 0,2–5 мкл моль / л SFN в течение 24 часов. Чтобы гарантировать отсутствие цитотоксичности в результате обработки этими сероорганическими соединениями, мы сначала провели анализ жизнеспособности клеток. Метод с 3- (4,5-диметилтиазол-2ил) -2,5-дифенилтетразолийбромидом показал, что каждое из сероорганических соединений, испытанных при концентрациях, указанных выше, приводило к жизнеспособности клеток> 95% (данные не показаны).

    Иммуноблоттинг показал, что LA, DHLA и SFN дозозависимо индуцировали экспрессию белка GSTP в клетках клона 9 (рис. 1). LA и DHLA при 600 μ моль / л вызывали повышение уровня GSTP в 5,4 и 4,8 раза соответственно по сравнению с контрольными клетками ( P <0,05). Эта индукция была аналогична индукции, отмеченной в клетках, обработанных 50 мкл моль / л DATS. Интересно отметить, что SFN продемонстрировала наибольшую эффективность в повышении экспрессии GSTP среди всех протестированных сероорганических соединений.8,1-кратная индукция экспрессии GSTP была достигнута при воздействии на клетки 5 мкМ моль / л SFN.

    РИСУНОК 1

    Уровни белка GSTP, индуцированные сероорганическими соединениями. Клетки культивировали только с 0,1% ДМСО (-) или с различными концентрациями DATS, LA, DHLA или SFN в течение 24 часов. Белок GSTP определяли методом иммуноблоттинга. Всего для электрофореза использовали 4 мкл г белка для каждого образца. Изменения экспрессии белка GSTP измеряли денситометрией.Данные были нормализованы по экспрессии β-актина. Уровень в контрольных ячейках был установлен на 1. Каждое значение представляет собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 4. Средние значения без общей буквы отличаются, P <0,05.

    РИСУНОК 1

    Уровни белка GSTP, индуцированные сероорганическими соединениями. Клетки культивировали только с 0,1% ДМСО (-) или с различными концентрациями DATS, LA, DHLA или SFN в течение 24 часов. Белок GSTP определяли методом иммуноблоттинга. Всего для электрофореза использовали 4 мкл г белка для каждого образца.Изменения экспрессии белка GSTP измеряли денситометрией. Данные были нормализованы по экспрессии β-актина. Уровень в контрольных ячейках был установлен на 1. Каждое значение представляет собой среднее значение ± стандартное отклонение, n = 4. Средние значения без общей буквы отличаются, P <0,05.

    Сероорганические соединения влияют на уровень и активность мРНК GSTP.

    С помощью ПЦР в реальном времени увеличение уровней мРНК GSTP соответствовало изменениям, отмеченным в экспрессии белка. DATS вызвал ошибку 1.1-кратное увеличение уровня мРНК GSTP по сравнению с контрольными клетками ( P <0,05). Наблюдалась дозозависимая индукция мРНК GSTP в клетках, обработанных LA, DHLA и SFN. Увеличение экспрессии, вызванное SFN, было выше, чем вызванное LA или DHLA ( рис. 2 A ). Опять же, активность фермента по отношению к этакриновой кислоте дозозависимо увеличивалась под действием LA, DHLA и SFN (рис. 2B).

    РИСУНОК 2

    Экспрессия мРНК и ферментативная активность GSTP, индуцированная сероорганическими соединениями.Клетки обрабатывали одним ДМСО (-) или различными концентрациями DATS, LA, DHLA или SFN в течение 24 часов. ( A ) ПЦР в реальном времени экспрессии мРНК GSTP. Уровень мРНК GSTP в контрольных клетках принимали за 1. ( B ) активность GST, определяемую с использованием этакриновой кислоты в качестве субстрата. Значения представляют собой средние значения ± стандартное отклонение, n = 3–4. Группы без общей буквы различаются, P <0,05.

    РИСУНОК 2

    Экспрессия мРНК и ферментативная активность GSTP, индуцированная сероорганическими соединениями.Клетки обрабатывали одним ДМСО (-) или различными концентрациями DATS, LA, DHLA или SFN в течение 24 часов. ( A ) ПЦР в реальном времени экспрессии мРНК GSTP. Уровень мРНК GSTP в контрольных клетках принимали за 1. ( B ) активность GST, определяемую с использованием этакриновой кислоты в качестве субстрата. Значения представляют собой средние значения ± стандартное отклонение, n = 3–4. Группы без общей буквы различаются, P <0,05.

    Активность промотора GSTP.

    Конструкции различной длины временно трансфицировали в клетки клона 9, чтобы проверить, модулируется ли промоторная активность гена GSTP сероорганическими соединениями, и найти возможные ответные сайты.С репортером Luc-2713, 600 мкМ моль / л LA или DHLA и 5 мкл моль / л SFN приводили к активности люциферазы в 2,0, 1,5 и 3,7 раза соответственно, чем в контрольные клетки ( P <0,05) (фиг. 3A). 1,7-кратное увеличение репортерной активности было отмечено в клетках, обработанных 50 мкМ моль / л DATS. Однако, когда область от -2713 до -2605 п.н. (GPEI) промотора GSTP (Luc-2604) была удалена, это увеличение репортерной активности полностью прекратилось, и активность была аналогична активности, отмеченной в клетках, трансфицированных Luc -2375.

    РИСУНОК 3

    GPEI необходим для активации GSTP с помощью сероорганических соединений, производных от фито. ( A ) Клетки трансфицировали различными конструкциями, а затем обрабатывали 50 μ моль / л DATS, 600 μ моль / л LA, 600 μ моль / л DHLA или 5 μ моль / л. Л СФН за 15 ч. Люциферазная активность клеток, трансфицированных pTA-2713 и обработанных только DMSO (-), была расценена как 1. ( B ) Конструкция, связанная с GPEI, трансфицировалась в клетки и клетки обрабатывались DATS, LA, DHLA или SFN за 15 ч.Значения представляют собой средние значения ± стандартное отклонение, n = 3–4. Группы в одной конструкции без общей буквы различаются: P <0,05. # В отличие от 2 делеционных конструкций в одной обработке, P <0,05.

    РИСУНОК 3

    GPEI требуется для активации GSTP с помощью сероорганических соединений, производных от фито. ( A ) Клетки трансфицировали различными конструкциями, а затем обрабатывали 50 μ моль / л DATS, 600 μ моль / л LA, 600 μ моль / л DHLA или 5 μ моль / л. Л СФН за 15 ч.Люциферазная активность клеток, трансфицированных pTA-2713 и обработанных только DMSO (-), была расценена как 1. ( B ) Конструкция, связанная с GPEI, трансфицировалась в клетки и клетки обрабатывались DATS, LA, DHLA или SFN за 15 ч. Значения представляют собой средние значения ± стандартное отклонение, n = 3–4. Группы в одной конструкции без общей буквы различаются: P <0,05. # В отличие от 2 делеционных конструкций в одной обработке, P <0,05.

    Чтобы дополнительно продемонстрировать важность GPEI в экспрессии GSTP в ответ на сероорганические соединения, была создана репортерная конструкция (Luc-GPE) путем лигирования геномного сегмента GPEI длиной 109 п.о. (от -2713 до -2605 п.о.) в кодирующую область люциферазы. .Результаты ясно показали, что DATS, LA, DHLA и SFN увеличивают активность репортера на 243, 189, 143 и 352% соответственно по сравнению с таковой в контрольных клетках ( P <0,05) (рис. 3B). Эти данные устанавливают, что GPEI несет элемент, реагирующий на сероорганическое соединение, и что этот элемент необходим для стимуляции активности промотора.

    Белковая активность связывания GPEI по EMSA.

    EMSA использовали для идентификации факторов транскрипции, которые были связаны с GPEI.В присутствии сероорганических соединений активность связывания ДНК достигает максимума через 0,5–1 ч (рис. 4А). Специфичность взаимодействия ДНК-белок для GPEI была продемонстрирована конкурентным анализом со 100-кратным избытком немеченого двухцепочечного олигонуклеотида (холодный), а также с мутантным двухцепочечным олигонуклеотидом (mut). Затем был проведен суперсдвиг с использованием высокоспецифичных антител, направленных против c-jun и Nrf2. Полоса ядерного белка GPEI была аннулирована, и суперсдвиг произошел в присутствии антитела против c-Jun (рис.4Б). Кроме того, перед EMSA проводили иммунопреципитацию антителом против Nrf2. Как уже отмечалось, антитело против Nrf2 уменьшало связывание ядерных белков с олигонуклеотидами GPEI (фиг. 4B). Сопровождаемый уменьшением связывания Nrf2-GPEI, Nrf2 в ядерных иммунопреципитатах увеличивался в клетках, обработанных сероорганическими соединениями (рис. 4C). Активация c-Jun после иммунопреципитации антителом против c-Jun согласуется с результатом индуцированного сероорганическим соединением накопления ядерного Nrf2 в ядре.После иммунопреципитации определяли, взаимодействует ли c-Jun с Nrf2, выступая в качестве партнера. Nrf2 не был обнаружен в ядерных иммунопреципитатах с антителом c-Jun (фиг. 4C). Точно так же в иммунопреципитатах Nrf2 не было обнаружено p-c-Jun.

    РИСУНОК 4

    Активация связывающей активности GPEI фитоорганическими соединениями серы. ( A ) Клетки обрабатывали 200 μ моль / л DATS, 600 μ моль / л LA, 600 μ моль / л DHLA или 5 μ моль / л SFN в течение указанного времени и ядерные экстракты были приготовлены для измерения активности связывания GPEI с помощью EMSA.Свободный зонд внизу не показан. ( B ) Ядерные белки, выделенные из клеток, обработанных DATS в течение 3 часов и LA, DHLA, SFN в течение 1 часа, сначала добавляли олигонуклеотиды GPEI в каждую реакцию в течение 30 минут, а затем инкубировали с антителами к c-Jun в течение дополнительные 30 мин при комнатной температуре. Последующие комплексы супер-сдвига разделяли электрофорезом в 6% акриламидном геле. Аликвоты супернатанта после иммунопреципитации антителом против Nrf2 использовали для EMSA.( C ) Ядерные экстракты, выделенные из клеток, обработанных DATS в течение 3 часов и LA, DHLA и SFN в течение 1 часа, подвергали иммунопреципитации (IP) антителами против Nrf2 или c-Jun. Аликвоты осадка после IP (15 мкл г) использовали для иммуноблоттинга (IB) с антителами против Nrf2 или против фосфо-c-Jun. Показанные результаты являются репрезентативными для 4 экспериментов.

    РИСУНОК 4

    Активация связывающей активности GPEI фитоорганическими соединениями серы. ( A ) Клетки обрабатывали 200 μ моль / л DATS, 600 μ моль / л LA, 600 μ моль / л DHLA или 5 μ моль / л SFN в течение указанного времени и ядерные экстракты были приготовлены для измерения активности связывания GPEI с помощью EMSA.Свободный зонд внизу не показан. ( B ) Ядерные белки, выделенные из клеток, обработанных DATS в течение 3 часов и LA, DHLA, SFN в течение 1 часа, сначала добавляли олигонуклеотиды GPEI в каждую реакцию в течение 30 минут, а затем инкубировали с антителами к c-Jun в течение дополнительные 30 мин при комнатной температуре. Последующие комплексы супер-сдвига разделяли электрофорезом в 6% акриламидном геле. Аликвоты супернатанта после иммунопреципитации антителом против Nrf2 использовали для EMSA.( C ) Ядерные экстракты, выделенные из клеток, обработанных DATS в течение 3 часов и LA, DHLA и SFN в течение 1 часа, подвергали иммунопреципитации (IP) антителами против Nrf2 или c-Jun. Аликвоты осадка после IP (15 мкл г) использовали для иммуноблоттинга (IB) с антителами против Nrf2 или против фосфо-c-Jun. Показанные результаты являются репрезентативными для 4 экспериментов.

    Экспрессия других ферментов фазы II.

    Мы также оценили экспрессию других ферментов детоксикации, которые, как известно, активируются Nrf2-зависимым механизмом, включая GSTA, GATM и NQO-1, с помощью иммуноблотов.Как указано, различные концентрации LA, DHLA и SFN дозозависимо стимулировали содержание белков GSTA, GSTM и NQO-1, а также концентрации, отмеченные для GSTP (фиг. 5A). Кроме того, активность фермента по отношению к 1-хлор-2,4-динитробензолу (фиг. 5B) и 2,6-дихлориндофенолу (фиг. 5C) увеличивалась под действием DATS, LA, DHLA и SFN.

    РИСУНОК 5

    Экспрессия белка и ферментативная активность ферментов детоксикации фазы II, индуцированная сероорганическими соединениями. Клетки культивировали с 0.1% ДМСО (-) или с различными концентрациями DATS, LA, DHLA или SFN в течение 24 часов. ( A ) Белки GSTA, GSTM и NQO1 определяли методом иммуноблоттинга. Для электрофореза использовали в общей сложности 8 мкл г белка для каждого образца. Белок был количественно определен денситометрией, и уровень в контрольных клетках был установлен равным 1. Значения представляют собой средние значения (SD), n = 3. Средние значения без общей буквы отличаются, P <0,05. Для определения GST ( B ) и активности NQO1 ( C ).Значения представляют собой средние значения ± стандартное отклонение, n = 3–4. Группы без общей буквы различаются, P <0,05.

    РИСУНОК 5

    Экспрессия белка и ферментативная активность ферментов детоксикации фазы II, индуцированная сероорганическими соединениями. Клетки культивировали только с 0,1% ДМСО (-) или с различными концентрациями DATS, LA, DHLA или SFN в течение 24 часов. ( A ) Белки GSTA, GSTM и NQO1 определяли методом иммуноблоттинга. Для электрофореза использовали в общей сложности 8 мкл г белка для каждого образца.Белок был количественно определен денситометрией, и уровень в контрольных клетках был установлен равным 1. Значения представляют собой средние значения (SD), n = 3. Средние значения без общей буквы отличаются, P <0,05. Для определения GST ( B ) и активности NQO1 ( C ). Значения представляют собой средние значения ± стандартное отклонение, n = 3–4. Группы без общей буквы различаются, P <0.05.

    Обсуждение

    Важность GSTP в профилактике рака подтверждается открытием, что у мышей, лишенных этого детоксикационного фермента, значительно повышается частота рака кожи, вызванного 7,12-диметилбензантраценом (14). Также сообщалось, что точечная мутация в гене GSTP, которая приводит к снижению активности фермента, связана с повышенным риском рака полости рта, мочевого пузыря, легких, яичек, гортани и груди (34). Более того, поскольку GSTP может быть вызван многочисленными диетическими факторами, считается, что усиление экспрессии и активности GSTP с помощью режима питания является практическим средством химиопрофилактики рака.Фактически, исследования показали, что подавление вызванного бензо [ a ] пиреном неопластического образования лесного желудка у мышей с помощью чеснока положительно связано с его способностью модулировать экспрессию фермента GSTP (13,35). Чесночное масло и аллилсульфиды чеснока, включая диаллилдисульфид и DATS, которые считаются мощными химиопрофилактическими агентами, являются эффективными индукторами GSTP в тонком кишечнике, печени и легких (36). В этом исследовании наши результаты показали, что сероорганические соединения из овощей, кроме чеснока, также действуют как индукторы GSTP с различной эффективностью.Более того, мы также показали, что такая повышающая регуляция транскрипции гена GSTP этими сероорганическими соединениями, вероятно, зависит от AP-1 и Nrf2.

    В этом исследовании LA, DHLA и SFN дозозависимо увеличивали белок GSTP в клетках клона 9 (рис. 1). Из протестированных сероорганических соединений наибольшую эффективность в повышающей регуляции экспрессии GSTP показали SFN, за ней следовали DATS, тогда как LA и DHLA были наименее эффективными. Такое несоответствие между сероорганическими соединениями согласуется с их дифференциальным увеличением мРНК GSTP и ферментативной активности (рис.2). Более того, обработка LA, DHLA и SFN вызывала относительно большую индукцию по сравнению с контролем в белке GSTP, чем в мРНК GSTP или активности фермента. Это может быть связано с уникальной регуляцией стабильности мРНК GSTP и (или) посттрансляционными механизмами, включающими протеасомную деградацию вновь синтезированных белков GSTP этими соединениями (37). Представляет интерес понять, как эти сероорганические соединения по-разному регулируют экспрессию гена GSTP. Хотя объяснение этому открытию в настоящее время недоступно, возможным объяснением могут быть различные фармакологические свойства этих сероорганических соединений в клетках печени (38).Наши находки предполагают, что восходящая передача сигналов, активирующая AP-1 и Nrf2, вероятно, играет ключевую роль в дифференциальной транскрипции гена GSTP.

    Чтобы продемонстрировать рабочий механизм, с помощью которого сероорганические соединения активируют транскрипцию GSTP, мы сконструировали Luc-репортеры с последовательной делецией 5′-фланкирующей области промотора гена GSTP. Эти результаты ясно показали, что участок от -2713 до -2605 п.н. необходим для индукции LA, DHLA и SFN экспрессии GSTP в клетках клона 9 (рис.3). Однако второй энхансер GPEII (от -2604 до -2376 п.н.), который находится рядом с GPEI, не влиял на индукцию гена GSTP. Этот вывод согласуется с работой Okuda et al. (16), которые сообщили, что GPEI является основным регуляторным элементом, ответственным за индукцию GSTP. Опубликованные данные свидетельствуют о том, что AP-1 является основным фактором транскрипции, который связывается с TRE-подобным элементом в GPEI (17). AP-1 в основном состоит из димеров белков c-Jun и c-Fos. Результаты нашего анализа супер-сдвига в настоящем исследовании ясно показали, что c-Jun участвует в образовании комплексов ядерный белок-GPEI, индуцированных LA, DHLA и SFN (рис.4Б).

    Сообщается, что помимо AP-1 в повышающей регуляции экспрессии GSTP участвуют несколько других факторов транскрипции. В недифференцированных эмбриональных стволовых клетках F9, которые обладают очень низкой активностью AP-1, элемент GPEI активен AP-1-независимым образом (39). Nrf2 является одним из факторов транскрипции, который привлекает большое внимание из-за гомологии последовательностей между TRE-подобными последовательностями на GPEI (5′-AGTCAGTCACTATGATTCAGCA-3 ‘) и консервативными последовательностями ARE (5′-GTGACNNNGCA-3’ ).Связывание Nrf2 / MafK с GPEI и активация экспрессии GSTP крысы были показаны во время гепатоканцерогенеза (18). Однако при обработке эпителиальных клеток печени RL34 15-дезокси-Δ-простагландином j2 (12,14) считалось, что Nrf2 не является важным компонентом, ответственным за трансактивацию GPEI (40). Хотя роль Nrf2 в модулировании экспрессии GSTP у крыс не установлена, важность Nrf2 в регуляции транскрипции генов GSTP человека и мыши хорошо задокументирована (41,42).Например, было показано, что индукция GSTP 6-метилсульфинилгексилизотиоцианатом васаби, аналога SFN, полностью устраняется у мышей с дефицитом Nrf2 (43). Чтобы проверить, связывается ли Nrf2 с GPEI, мы провели анализ, сочетающий иммунопреципитацию и EMSA. Наши результаты ясно показали, что в дополнение к AP-1, Nrf2 может связываться с GPEI. Было показано, что c-Jun является связывающим фактором при активации ARE-зависимой транскрипции. Nrf2 в ассоциации с белками Jun регулирует ARE-опосредованную экспрессию и координированную индукцию генов, кодирующих детоксифицирующие ферменты (44).Результаты недавней работы Levy et al. (45) подтверждают, что c-Jun, по-видимому, является партнером Nrf2 в повышающей регуляции экспрессии ARE в эпителиальных клетках бронхов человека, подвергнутых воздействию 4-гидрокси-2-ноненаля, хотя ответ варьируется в зависимости от определенных генов и типов клеток. В этом исследовании результат иммунопреципитации показал, что Nrf2 не может напрямую связываться с c-Jun. Взятые вместе, результаты EMSA показали, что активация этого фермента детоксикации фазы II с помощью LA и SFN, вероятно, происходит через несколько белковых факторов, по крайней мере, c-Jun и Nrf2, которые могут действовать сложным образом.

    В ответ на многочисленные прооксиданты и электрофильность Nrf2 диссоциирует от белка Keap и быстро перемещается из цитозоля в ядро, где он образует гетеродимер с малым Maf и связывается с ARE. Это связывание Nrf2 с ARE активирует транскрипцию многих ферментов цитозащиты. К ним относятся глутаматцистеинлигаза, гемоксигеназа 1, NQO1 и GST (21,27,43,46). Во многих типах клеток SFN рассматривается как мощный активатор Nrf2, который приводит к усилению регуляции изоферментов NQO1 и GST, включая GSTA и GSTM (43,47,48).Это повышение уровней этих детоксикационных ферментов объясняет, по крайней мере частично, защиту SFN от химических канцерогенов, таких как индуцированное бензо [ a ] пиреном образование опухолей желудка и толстой кишки (20,49). В настоящем исследовании увеличение GSTA, GSTM и NQO1 было также отмечено в клетках, обработанных SFN, что предполагает активацию пути Nrf2-ARE при обработке клеток Clone 9 SFN (рис. 5).

    LA, помимо общепризнанной роли кофермента, является природным антиоксидантом (24).LA быстро поглощается клетками, где он может быть восстановлен до DHLA с помощью таких ферментов, как дигидролипоамиддегидрогеназа, глутатионредуктаза или тиоредоксинредуктаза. DHLA, продуцируемый внутри клетки, является мощным восстанавливающим агентом, который может даже восстанавливать дисульфиды белка до сульфгидрилов белка, а также восстанавливать цистин до цистеина, который является ограничивающим субстратом для синтеза глутатиона (50). Несколько исследований in vivo также предоставили доказательства того, что добавка LA снижает окислительный стресс и восстанавливает пониженные уровни других антиоксидантов при различных физиологических и патофизиологических условиях в тканях мозга и сердца, а также в эритроцитах (51,52).В дополнение к действию как кофермент и антиоксидант, недавняя работа показывает, что LA также может действовать как индуктор нескольких ферментов детоксикации фазы II, включая GSTA и NQO1, через белок связывания CCAAT / энхансер и Nrf2-зависимый путь (8). В этом исследовании мы также показали, что LA и DHLA активируют транслокацию AP-1 и Nrf2 в ядро, где они связываются с GPEI и активируют транскрипцию GSTP.

    Таким образом, SFN, LA, DHLA и DATS являются эффективными индукторами транскрипции гена GSTP, и SFN проявляет наибольшую эффективность.Более того, связывание AP-1 и Nrf2 с энхансерным элементом GPEI необходимо для индукции этого фермента детоксикации фазы II.

    C.K.L., H.W.C. и C.W.T. спланированное исследование; C.W.T., K.L.L. и C.K.L. проведенное исследование; Y.P.C. и A.H.L. проанализированные данные; C.K.L. и C.W.T. написал газету. C.W.T. несет основную ответственность за окончательный контент. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

    Цитированная литература

    1.

    Мориарти

    RM

    ,

    Naithani

    R

    ,

    Surve

    B

    .

    Сероорганические соединения в химиопрофилактике рака

    .

    Mini Rev Med Chem.

    2007

    ;

    7

    :

    827

    38

    . 2.

    Higdon

    JV

    ,

    Delage

    B

    ,

    Williams

    DE

    ,

    Dashwood

    RH

    .

    Крестоцветные овощи и риск рака у человека: эпидемиологические данные и механистическая основа

    .

    Pharmacol Res.

    2007

    ;

    55

    :

    224

    36

    .3.

    Howard

    EW

    ,

    Ling

    MT

    ,

    Chua

    CW

    ,

    Cheung

    HW

    ,

    Wang

    X

    ,

    Wong

    YC

    .

    S-аллилмеркаптоцистеин, полученный из чеснока, является новым антиметастатическим средством in vivo при андрогеннезависимом раке простаты

    .

    Clin Cancer Res.

    2007

    ;

    13

    :

    1847

    56

    . 4.

    Wang

    L

    ,

    Gaziano

    JM

    ,

    Norkus

    EP

    ,

    Buring

    JE

    ,

    Sesso

    HD

    .

    Связь каротиноидов плазмы с факторами риска и биомаркерами сердечно-сосудистых заболеваний у женщин среднего и старшего возраста

    .

    Am J Clin Nutr.

    2008

    ;

    88

    :

    747

    54

    . 5.

    Ogunleye

    AA

    ,

    Xue

    F

    ,

    Michels

    KB

    .

    Потребление зеленого чая и риск или рецидив рака груди: метаанализ

    .

    Лечение рака груди.

    2010

    ;

    119

    :

    477

    84

    .6.

    Джонс

    SB

    ,

    Брукс

    JD

    .

    Умеренная индукция активности фермента фазы 2 в простате крысы F-344

    .

    BMC Рак.

    2006

    ;

    6

    :

    62

    .7.

    Hanlon

    N

    ,

    Okpara

    A

    ,

    Coldham

    N

    ,

    Sauer

    MJ

    ,

    Ioannides

    C

    .

    Модуляция цитохромов печени и легких крыс P450 и ферментных систем фазы II эруцином, изотиоцианатом, структурно связанным с сульфорафаном

    .

    J Agric Food Chem.

    2008

    ;

    56

    :

    7866

    71

    .8.

    Ki

    SH

    ,

    Kim

    SG

    .

    Индукция фермента фазы II альфа-липоевой кислотой через фосфатидилинозитол-3-киназозависимую активацию C / EBPs

    .

    Xenobiotica.

    2008

    ;

    38

    :

    587

    604

    .9.

    Вилла-Крус

    В

    ,

    Давила

    J

    ,

    Виана

    MT

    ,

    Васкес-Духальт

    R

    .

    Влияние брокколи (Brassica oleracea) и ее фитохимического сульфорафана в сбалансированных диетах на уровни детоксикационных ферментов тилапии (Oreochromis niloticus), подвергшейся воздействию канцерогенных и мутагенных загрязнителей

    .

    Chemosphere.

    2009

    ;

    74

    :

    1145

    51

    .10.

    Странно

    RC

    ,

    Спитери

    MA

    ,

    Рамачандран

    S

    ,

    Фритюрница

    AA

    .

    Семейство ферментов глутатион-S-трансферазы

    .

    Mutat Res.

    2001

    ;

    482

    :

    21

    6

    . 11.

    Satoh

    K

    ,

    Kitahara

    A

    ,

    Soma

    Y

    ,

    Inaba

    Y

    ,

    Hatayama

    I

    ,

    Sato

    K

    .

    Очистка, индукция и распространение плацентарной глутатионтрансферазы: новый фермент-маркер для предопухолевых клеток в химическом гепатоканцерогенезе крыс

    .

    Proc Natl Acad Sci USA.

    1985

    ;

    82

    :

    3964

    8

    .12.

    Цучида

    S

    ,

    Sato

    K

    .

    Трансферазы глутатиона и рак

    .

    Crit Rev Biochem Mol Biol.

    1992

    ;

    27

    :

    337

    84

    .13.

    Hu

    X

    ,

    Benson

    PJ

    ,

    Srivastava

    SK

    ,

    Xia

    H

    ,

    Bleicher

    RJ

    ,

    Zaren

    HA

    ,

    Awasthi

    S

    ,

    Авасти

    YC

    ,

    Сингх

    SV

    .

    Индукция глутатион-S-трансферазы pi в качестве биоанализа для оценки эффективности ингибиторов рака, индуцированного бензо [a] пиреном, на мышиной модели

    .

    Int J Cancer.

    1997

    ;

    73

    :

    897

    902

    . 14.

    Хендерсон

    CJ

    ,

    Smith

    AG

    ,

    Ure

    J

    ,

    Коричневый

    K

    ,

    Bacon

    EJ

    ,

    Wolf

    CR

    .

    Повышенный онкогенез кожи у мышей, лишенных S-трансферазы глутатиона pi класса

    .

    Proc Natl Acad Sci USA.

    1998

    ;

    95

    :

    5275

    80

    .15.

    Sakai

    M

    ,

    Okuda

    A

    ,

    Muramatsu

    M

    .

    Множественные регуляторные элементы и реакция на форбол 12-O-тетрадеканоат 13-ацетат гена плацентарной глутатионтрансферазы крысы

    .

    Proc Natl Acad Sci USA.

    1988

    ;

    85

    :

    9456

    60

    . 16.

    Okuda

    A

    ,

    Imagawa

    M

    ,

    Maeda

    Y

    ,

    Sakai

    M

    ,

    Muramatsu

    M

    .

    Структурный и функциональный анализ энхансера GPEI, имеющего последовательность, подобную чувствительному элементу форбол 12-O-тетрадеканоат 13-ацетат, обнаруженную в гене

    глутатионтрансферазы P крысы.

    J Biol Chem.

    1989

    ;

    264

    :

    16919

    26

    . 17.

    Angel

    P

    ,

    Imagawa

    M

    ,

    Chiu

    R

    ,

    Stein

    B

    ,

    Imbra

    RJ

    ,

    Rahmsdorf

    HJ

    ,

    Jonat

    C

    ,

    Herrlich

    P

    ,

    Karin

    M

    .

    Гены, индуцируемые сложным эфиром форбола, содержат общий цис-элемент, распознаваемый TPA-модулируемым транс-действующим фактором

    .

    Cell.

    1987

    ;

    49

    :

    729

    39

    . 18.

    Икеда

    H

    ,

    Ниши

    S

    ,

    Сакаи

    M

    .

    Фактор транскрипции Nrf2 / MafK регулирует ген глутатион-S-трансферазы плаценты крысы во время гепатоканцерогенеза

    .

    Biochem J.

    2004

    ;

    380

    :

    515

    21

    .19.

    Zhu

    H

    ,

    Jia

    Z

    ,

    Strobl

    JS

    ,

    Ehrich

    M

    ,

    Misra

    HP

    ,

    Li

    Y

    .

    Мощная индукция общих клеточных и митохондриальных антиоксидантов и ферментов фазы 2 крестоцветным сульфорафаном в гладкомышечных клетках аорты крысы: цитопротекция против окислительного и электрофильного стресса

    .

    Cardiovasc Toxicol.

    2008

    ;

    8

    :

    115

    25

    .20.

    Bonnesen

    C

    ,

    Eggleston

    IM

    ,

    Hayes

    JD

    .

    Диетические индолы и изотиоцианаты, полученные из овощей семейства крестоцветных, могут как стимулировать апоптоз, так и обеспечивать защиту от повреждения ДНК в линиях клеток толстой кишки человека

    .

    Cancer Res.

    2001

    ;

    61

    :

    6120

    30

    . 21.

    Кеум

    YS

    ,

    Yu

    S

    ,

    Chang

    PP

    ,

    Yuan

    X

    ,

    Kim

    JH

    ,

    Xu

    C

    ,

    Han

    J

    ,

    Агарвал

    A

    ,

    Kong

    AN

    .

    Механизм действия сульфорафана: ингибирование митоген-активированных изоформ протеинкиназы p38, способствующих индукции опосредованной антиоксидантным ответом гемоксигеназы-1 в клетках гепатомы человека HepG2

    .

    Cancer Res.

    2006

    ;

    66

    :

    8804

    13

    . 22.

    Wagner

    AE

    ,

    Ernst

    I

    ,

    Iori

    R

    ,

    Desel

    C

    ,

    Rimbach

    G

    .

    Сульфорафан, но не аскорбиген, индол-3-карбинол и аскорбиновая кислота активируют фактор транскрипции Nrf2 и индуцируют фазу-2 и антиоксидантные ферменты в кератиноцитах человека в культуре

    .

    Exp Dermatol.

    2010

    ;

    19

    :

    137

    44

    . 23.

    Пакер

    L

    ,

    Witt

    EH

    ,

    Tritschler

    HJ

    .

    Альфа-липоевая кислота как биологический антиоксидант

    .

    Free Radic Biol Med.

    1995

    ;

    19

    :

    227

    50

    . 24.

    Bustamante

    J

    ,

    Lodge

    JK

    ,

    Marcocci

    L

    ,

    Tritschler

    HJ

    ,

    Packer

    L

    ,

    Rihn

    BH

    .

    Альфа-липоевая кислота в метаболизме и заболеваниях печени

    .

    Free Radic Biol Med.

    1998

    ;

    24

    :

    1023

    39

    .25.

    Biewenga

    GP

    ,

    Haenen

    GR

    ,

    Bast

    A

    .

    Фармакология антиоксиданта липоевой кислоты

    .

    Gen Pharmacol.

    1997

    ;

    29

    :

    315

    31

    0,26.

    Jia

    Z

    ,

    Hallur

    S

    ,

    Zhu

    H

    ,

    Li

    Y

    ,

    Misra

    HP

    .

    Сильная повышающая регуляция глутатиона и NAD (P) H: хинон оксидоредуктазы 1 альфа-липоевой кислотой в клетках нейробластомы человека SH-SY5Y: защита от цитотоксичности, вызванной нейротоксикантами

    .

    Neurochem Res.

    2008

    ;

    33

    :

    790

    800

    0,27.

    Элангован

    S

    ,

    Hsieh

    TC

    .

    Контроль клеточного окислительно-восстановительного статуса и активация хинонредуктазы NQO1 посредством активации Nrf2 альфа-липоевой кислотой в клетках HL-60 лейкемии человека

    .

    Int J Oncol.

    2008

    ;

    33

    :

    833

    8

    ,28.

    Цай

    CW

    ,

    Ян

    JJ

    ,

    Чен

    HW

    ,

    Шин

    LY

    ,

    Lii

    СК

    .

    Сероорганические соединения чеснока повышают экспрессию класса pi глутатион-S-трансферазы в первичных гепатоцитах крысы

    .

    J Nutr.

    2005

    ;

    135

    :

    2560

    5

    . 29.

    Цай

    CW

    ,

    Чен

    HW

    ,

    Ян

    JJ

    ,

    Шин

    LY

    ,

    Lii

    СК

    .

    Диаллилдисульфид и диаллилтрисульфид повышают экспрессию класса pi глутатион-S-трансферазы через AP-1-зависимый путь

    .

    J Agric Food Chem.

    2007

    ;

    55

    :

    1019

    26

    .30.

    Wu

    CC

    ,

    Sheen

    LY

    ,

    Chen

    HW

    ,

    Kuo

    WW

    ,

    Tsai

    SJ

    ,

    Lii

    CK

    .

    Дифференциальное влияние чесночного масла и трех его основных серорганических компонентов на систему детоксикации печени у крыс

    .

    J Agric Food Chem.

    2002

    ;

    50

    :

    378

    83

    . 31.

    Леманн

    U

    ,

    Крейпе

    H

    .

    ПЦР-анализ в реальном времени ДНК и РНК, экстрагированных из фиксированных формалином и залитых парафином биоптатов

    .

    Методы.

    2001

    ;

    25

    :

    409

    18

    . 32.

    Mannervik

    B

    ,

    Alin

    P

    ,

    Guthenberg

    C

    ,

    Jensson

    H

    ,

    Tahir

    MK

    ,

    Warholm

    M

    ,

    Jornvall

    H

    .

    Идентификация трех классов цитозольной глутатионтрансферазы, общих для нескольких видов млекопитающих: корреляция между структурными данными и ферментативными свойствами

    .

    Proc Natl Acad Sci USA.

    1985

    ;

    82

    :

    7202

    6

    0,33.

    Jamieson

    D

    ,

    Wilson

    K

    ,

    Pridgeon

    S

    ,

    Margetts

    JP

    ,

    Edmondson

    RJ

    ,

    Leung

    HY

    ,

    Knox

    R

    ,

    Кузов

    AV

    .

    NAD (P) H: активность и экспрессия хинон оксидоредуктазы 1 и nrh: хинон оксидоредуктазы 2 при раке мочевого пузыря и яичников и более низкая активность NRH: хинон оксидоредуктазы 2, связанная с однонуклеотидным полиморфизмом экзона 3 NQO2

    .

    Clin Cancer Res.

    2007

    ;

    13

    :

    1584

    90

    . 34.

    Taningher

    M

    ,

    Malacarne

    D

    ,

    Izzotti

    A

    ,

    Ugolini

    D

    ,

    Parodi

    S

    .

    Полиморфизмы метаболизма лекарственных средств как модуляторы предрасположенности к раку

    .

    Mutat Res.

    1999

    ;

    436

    :

    227

    61

    0,35.

    Hu

    X

    ,

    Benson

    PJ

    ,

    Srivastava

    SK

    ,

    Mack

    LM

    ,

    Xia

    H

    ,

    Gupta

    V

    ,

    Zaren

    HA

    ,

    Сингх

    SV

    .

    Глутатион S-трансферазы печени и лесного желудка самок мышей A / J и их дифференциальная индукция антиканцерогенными органосульфидами чеснока

    .

    Arch Biochem Biophys.

    1996

    ;

    336

    :

    199

    214

    0,36.

    Lii

    CK

    ,

    Tsai

    CW

    ,

    Wu

    CC

    .

    Аллилсульфиды чеснока демонстрируют дифференциальную модуляцию цитохрома P450 2B1 крысы и плацентарной формы глутатион-S-трансферазы в различных органах

    .

    J Agric Food Chem.

    2006

    ;

    54

    :

    5191

    6

    0,37.

    Чернг

    SH

    ,

    Hsu

    SL

    ,

    Ян

    JL

    ,

    Yu

    CT

    ,

    Lee

    H

    .

    Подавляющее действие 1-нитропирена на индуцированную бензо [α] пиреном экспрессию белка CYP1A1 в клетках HepG2

    .

    Toxicol Lett.

    2006

    ;

    161

    :

    236

    43

    .38.

    Kasuga

    S

    ,

    Uda

    N

    ,

    Kyo

    E

    ,

    Ushijima

    M

    ,

    Morihara

    N

    ,

    Itakura

    Y

    .

    Фармакологическая активность экстракта выдержанного чеснока по сравнению с другими препаратами из чеснока

    .

    J Nutr.

    2001

    ;

    131

    :

    S1080

    4

    .39.

    Okuda

    A

    ,

    Imagawa

    M

    ,

    Sakai

    M

    ,

    Muramatsu

    M

    .

    Функциональная кооперативность между двумя TPA-чувствительными элементами в недифференцированных эмбриональных стволовых клетках F9

    .

    EMBO J.

    1990

    ;

    9

    :

    1131

    5

    .40.

    Kawamoto

    Y

    ,

    Nakamura

    Y

    ,

    Naito

    Y

    ,

    Torii

    Y

    ,

    Kumagai

    T

    ,

    Osawa

    T

    ,

    Ohigashi

    H

    ,

    Satoh

    K

    ,

    Imagawa

    M

    и др.

    Циклопентеноновые простагландины как потенциальные индукторы ферментов детоксикации фазы II. 15-дезокси-дельта (12,14) -простагландин j2-индуцированная экспрессия S-трансфераз глутатиона

    .

    J Biol Chem.

    2000

    ;

    275

    :

    11291

    9

    .41.

    Nishinaka

    T

    ,

    Ichijo

    Y

    ,

    Ito

    M

    ,

    Kimura

    M

    ,

    Katsuyama

    M

    ,

    Iwata

    K

    ,

    Miura

    T

    ,

    Терада

    Т

    ,

    Ябе-Нишимура

    С

    .

    Куркумин активирует экспрессию человеческой глутатион-S-трансферазы P1 через элемент

    антиоксидантного ответа.

    Toxicol Lett.

    2007

    ;

    170

    :

    238

    47

    .42.

    Ikeda

    H

    ,

    Serria

    MS

    ,

    Kakizaki

    I

    ,

    Hatayama

    I

    ,

    Satoh

    K

    ,

    Tsuchida

    S

    ,

    Muramatsu

    M

    ,

    Ниси

    S

    ,

    Сакаи

    M

    .

    Активация гена мышиной глутатион-S-трансферазы Pi-класса Nrf2 (фактор 2, связанный с NF-E2) и андрогеном

    .

    Biochem J.

    2002

    ;

    364

    :

    563

    70

    .43.

    Morimitsu

    Y

    ,

    Nakagawa

    Y

    ,

    Hayashi

    K

    ,

    Fujii

    H

    ,

    Kumagai

    T

    ,

    Nakamura

    Y

    ,

    Osawa

    T

    ,

    Хорио

    F

    ,

    Ито

    К

    .

    Аналог сульфорафана, который сильно активирует Nrf2-зависимый путь детоксикации

    .

    J Biol Chem.

    2002

    ;

    277

    :

    3456

    63

    . 44.

    Венугопал

    R

    ,

    Jaiswal

    AK

    .

    Nrf2 и Nrf1 в ассоциации с белками Jun регулируют экспрессию, опосредованную элементами антиоксидантного ответа, и координированную индукцию генов, кодирующих детоксифицирующие ферменты

    .

    Онкоген.

    1998

    ;

    17

    :

    3145

    56

    .45.

    Леви

    S

    ,

    Jaiswal

    AK

    ,

    Forman

    HJ

    .

    Роль фосфорилирования c-Jun в активации EpRE генов фазы II

    .

    Free Radic Biol Med.

    2009

    ;

    47

    :

    1172

    9

    .46.

    Шенви

    SV

    ,

    Smith

    EJ

    ,

    Hagen

    TM

    .

    Регуляция транскрипции гена каталитической субъединицы гамма-глутамат цистеинлигазы крысы опосредуется через дистальный элемент антиоксидантного ответа

    .

    Pharmacol Res.

    2009

    ;

    60

    :

    229

    36

    0,47.

    Гао

    X

    ,

    Талалай

    P

    .

    Индукция генов фазы 2 с помощью сульфорафана защищает клетки пигментного эпителия сетчатки от фотоокислительного повреждения

    .

    Proc Natl Acad Sci USA.

    2004

    ;

    101

    :

    10446

    51

    . 48.

    Ritz

    SA

    ,

    Wan

    J

    ,

    Diaz-Sanchez

    D

    .

    Стимулированная сульфорафаном индукция фермента фазы II подавляет выработку цитокинов эпителиальными клетками дыхательных путей, стимулированными дизельным экстрактом

    .

    Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol.

    2007

    ;

    292

    :

    L33

    9

    .49.

    Fahey

    JW

    ,

    Haristoy

    X

    ,

    Dolan

    PM

    ,

    Kensler

    TW

    ,

    Scholtus

    I

    ,

    Stephenson

    KK

    ,

    Talalay

    P

    ,

    Лозневский

    А

    .

    Сульфорафан подавляет внеклеточные, внутриклеточные и устойчивые к антибиотикам штаммы Helicobacter pylori и предотвращает индуцированные бензо [a] пиреном опухоли желудка

    .

    Proc Natl Acad Sci USA.

    2002

    ;

    99

    :

    7610

    5

    .50.

    Сух

    JH

    ,

    Ван

    H

    ,

    Лю

    RM

    ,

    Лю

    J

    ,

    Hagen

    TM

    .

    (R) -альфа-липоевая кислота обращает связанную с возрастом потерю окислительно-восстановительного статуса GSH в постмитотических тканях: доказательства повышенной потребности в цистеине для синтеза GSH

    .

    Arch Biochem Biophys.

    2004

    ;

    423

    :

    126

    35

    . 51.

    Ghibu

    S

    ,

    Lauzier

    B

    ,

    Delemasure

    S

    ,

    Amoureux

    S

    ,

    Sicard

    P

    ,

    Vergely

    C

    ,

    Muresan

    A

    ,

    Могосан

    C

    ,

    Rochette

    L

    .

    Антиоксидантные свойства альфа-липоевой кислоты: влияние на проницаемость красной кровяной мембраны и адаптацию изолированного сердца крысы к обратимой ишемии

    .

    Mol Cell Biochem.

    2009

    ;

    320

    :

    141

    8

    ,52.

    Bilska

    A

    ,

    Dubiel

    M

    ,

    Sokolowska-Jezewicz

    M

    ,

    Lorenc-Koci

    E

    ,

    Wlodek

    L

    .

    Альфа-липоевая кислота по-разному влияет на вызванный резерпином окислительный стресс в полосатом теле и префронтальной коре головного мозга крысы

    .

    Неврология.

    2007

    ;

    146

    :

    1758

    71

    .

    Сокращения

    • AP-1

    • ARE

      антиоксидантный ответный элемент

    • DATS

    • DHLA

    • DMSO

    • DTT

    • EMSA

      Электромобильность анализ сдвига 900

      GAPDH

      глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа

    • GPEI

      π-класс глутатиона S -трансфераза энхансер I

    • GST

      глутатион S -трансфераза

      GST

      α-трансфераза

      глутатион S -трансфераза

    • GSTM

      μ класс глутатиона S -трансфераза

    • GSTP

      π -класс глутатиона S -трансфераза

      LA

    • НАД (Ф) Н-зависимый хинон окс идоредуктазы 1

    • Nrf2

      ядерный фактор, связанный с эритроидом-2 фактор 2

    • SFN

    • TRE

      12- O -тетрадеканоилфорбол-13-ацетатный реагирующий элемент

    Заметки автора

    © 2010 Американский институт питания

    Исследование NATHAN 1 — Mayo Clinic

    @article {6a595008bfbe4c8db42ed4abecf0604b,

    title = «Эффективность и безопасность антиоксидантного лечения α-липоевой кислотой в течение 4 лет при диабетической полинейропатии:» Исследование NATHAN 116 аннотация «,

    OBECTIVE — Оценить эффективность и безопасность α-липоевой кислоты (ALA) в течение 4 лет при легкой и умеренной диабетической дистальной симметричной сенсомоторной полинейропатии (DSPN).Дизайн и методы исследования. В многоцентровом рандомизированном двойном слепом исследовании в параллельных группах 460 пациентов с сахарным диабетом с легкой и средней степенью ДСПН были рандомизированы для перорального приема 600 мг АЛК один раз в день (n = 233) или плацебо (n = 227). ) на 4 года. Первичной конечной точкой был составной балл (оценка нарушения невропатии [NIS] — нижние конечности [NIS-LL] и семь нейрофизиологических тестов). Вторичные критерии оценки включали NIS, NIS-LL, нервную проводимость и количественные сенсорные тесты (QST). РЕЗУЛЬТАТЫ — Изменение первичной конечной точки по сравнению с исходным уровнем до 4 лет не показало значимой разницы между группами лечения (P = 0.105). Изменение по сравнению с исходным уровнем было значительно лучше для ALA, чем для плацебо для NIS (P = 0,028), NIS-LL (P = 0,05) и нижней оценки мышечной слабости NIS-LL (P = 0,045). У большего числа пациентов отмечалось клинически значимое улучшение и у меньшего числа пациентов отмечалось прогрессирование NIS (P = 0,013) и NIS-LL (P = 0,025) при приеме АЛК, чем при приеме плацебо. Результаты по нервной проводимости и QST существенно не ухудшились при приеме плацебо. Общая оценка переносимости лечения и прекращения лечения из-за отсутствия переносимости не различалась между группами.Частота серьезных нежелательных явлений была выше в группе АЛК (38,1%), чем в группе плацебо (28,0%). ВЫВОДЫ. Четырехлетнее лечение АЛК при ДСПН легкой и средней степени тяжести не повлияло на основную комбинированную конечную точку, но привело к клинически значимому улучшению и предотвращению прогрессирования нейропатических нарушений и хорошо переносилось. Поскольку первичная комбинированная конечная точка существенно не ухудшалась у субъектов, получавших плацебо, вторичная профилактика ее прогрессирования с помощью АЛК в соответствии с дизайном исследования была невозможна.»,

    author =» Дэн Зиглер и Лоу, {Филипп А.} и Личи, {Уильям Дж.} И Бултон, {Эндрю Дж. М.} и Виник, {Аарон И.}, Рой Фриман, Рустем Самигуллин и Ханс Тритшлер и Ульрих Мюнцель, Иоахим Маус и Клеменс Ш {\ «у} тте и Дик, {Питер Дж.}»,

    год = «2011»,

    месяц = ​​сентябрь,

    doi = «10.2337 / dc11-0503»,

    language = «English (US)»,

    volume = «34»,

    pages = «2054-2060»,

    journal = «Diabetes Care»,

    issn = «1935-5548»,

    publisher = «Американская диабетическая ассоциация Inc.»,

    number =» 9 «,

    }

    Амитриптилин по сравнению с альфа-липоевой кислотой в лечении болезненной диабетической полинейропатии

    Амитриптилин по сравнению с альфа-липоевой кислотой в лечении болезненной диабетической полинейропатии Болезненная диабетическая полинейропатия Болезненная диабетическая полинейропатия — серьезная проблема для здоровья. Существует потребность в лекарствах, которые обеспечивают значимое облегчение боли, улучшают качество жизни и хорошо переносятся. В настоящее время амитриптилин является золотым стандартом в лечении полинейропатии.Результаты недавних исследований показывают эффективность альфа-липоевой кислоты (ALA) в уменьшении боли у пациентов, страдающих диабетической полинейропатией. Целью этого исследования было сравнить эффективность и безопасность АЛК и амитриптилина в облегчении боли, связанной с диабетической полинейропатией. Это первое прямое исследование, в котором сравниваются оба агента. [Br] В этом рандомизированном, слепом, клиническом исследовании 32 пациента с диабетической полинейропатией, у которых была оценка боли не менее 40 мм по шкале ВАШ от 0 до 100 мм, были назначен для последовательного лечения 600 мг α-липоевой кислоты один раз в день внутривенно и плацебо перорально в течение 3 недель или для лечения амитриптилином перорально в минимальных эффективных дозах в диапазоне 25-75 мг (13 пациентов, получавших 25 мг, 1 [ndash] 50 мг и 2 [ndash] 75 мг) и плацебо внутривенно в течение 3 недель.Лечение тем же препаратом перорально в ранее установленных дозах продолжалось в амбулаторных условиях в течение 3 месяцев. Облегчение боли (SFMPQ-VAS), улучшение качества жизни (EuroQol EQ-5D) и возникновение нежелательных явлений оценивались еженедельно во время госпитализации и ежемесячно в течение периода амбулаторного наблюдения. [Br] A [sup3] Снижение на 50% ВАШ была отмечена у 7 (44%) пациентов, получавших альфа-липоевую кислоту, и у 6 (38%) пациентов, получавших амитриптилин ([курсив] P [/ курсив] = 0,19). Сравнимое снижение интенсивности боли было получено с обоими препаратами с первой недели ([Delta] VAS -13 [plusmn] 13 мм vs.-13 [plusmn] 14 мм, [курсив] P [/ курсив] = 0,94 соответственно). Улучшение качества жизни было значительно выше у пациентов, получавших амитриптилин, через 1 и 3 недели наблюдения по сравнению с ALA (соответственно: [Delta] EQ [sub] 1week [/ sub] 9 [plusmn] 13 vs. -1 [plusmn] 10, [Delta] EQ [sub] 3week [/ sub] 28 [plusmn] 21 против 12 [plusmn] 20, [курсив] P [/ курсив] [lt] 0,05). О нежелательных явлениях сообщалось только при приеме амитриптилина, причем сухость во рту была наиболее распространенной. [Br] В заключение, амитриптилин и α-липоевая кислота одинаково эффективны при лечении болезненной диабетической полинейропатии.Амитриптилин оказывает большее положительное влияние на качество жизни, но связан с более высоким риском побочных эффектов.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *